BPS Bioscience Anti-H3K36me3多克隆抗體：優化免疫沉淀與熒光檢測

針對組蛋白H3在賴氨酸36位點三甲基化（H3K36me3）的多克隆抗體，使用KLH偶聯的合成肽作為免疫原。  

作為BPS Bioscience在中國的區域總代理，艾美捷科技強烈推薦BPS Bioscience熱銷產品Anti-H3K36me3多克隆抗體。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

Anti-H3K36me3多克隆抗體：

克隆性：多克隆  

宿主物種/表達系統：兔  

純化方法：親和純化  

形式：水溶液緩沖液  

配方：含有0.05%疊氮化物和0.05% ProClin 300的PBS溶液  

濃度：50 ?g/56 ?l  

免疫原：合成肽  

背景：H3K36的三甲基化與活躍轉錄區域相關。  

儲存/穩定性：  

在–80°C下可保存長達2年。首次解凍后離心以最大化產品回收。分裝以避免反復凍融循環。分裝可在–20°C下保存至少一個月。

染色質免疫沉淀測序（ChIP-seq）結果  

使用針對H3K36me3的抗體（產品編號25250）進行染色質免疫沉淀（ChIP），實驗中使用2 ?g抗體處理來自100萬HeLaS3細胞的剪切染色質。以2 ?g IgG作為陰性免疫沉淀（IP）對照。通過優化的PCR引物對，對免疫沉淀的DNA進行QPCR分析，檢測活性GAPDH基因的啟動子和編碼區、GAPDH啟動子上游1 kb區域以及活性ACTB基因的編碼區（圖1A）。隨后，免疫沉淀的DNA在Illumina基因組分析儀上進行分析。文庫制備、簇生成和測序均按照制造商的說明進行。使用ELAND算法將36 bp標簽與人類基因組對齊。圖1B展示了12號染色體（包括GAPDH陽性對照）、7號染色體（包括ACTB陽性對照）、14號染色體和3號染色體的基因組區域結果。這些結果清楚地顯示了H3K36me3在活性基因上的富集。

染色質免疫沉淀（ChIP）結果  

使用HeLa細胞、針對H3K36me3的抗體（產品編號25250）和優化的qPCR引物集進行ChIP實驗。實驗中使用來自100萬細胞的剪切染色質?？贵w用量分別為1、2、5和10 ?g/ChIP進行梯度實驗分析。以2 ?g IgG作為陰性免疫沉淀（IP）對照。通過QPCR分析檢測活性GAPDH基因的啟動子和編碼區、GAPDH啟動子上游1 kb區域以及Sat2衛星重復序列的DNA回收率，以輸入DNA的百分比表示。

抗體滴度測定  

通過ELISA實驗測定抗體滴度，使用針對H3K36me3的抗體（產品編號25250）的系列稀釋液和粗制血清。實驗中使用含有目標組蛋白修飾的肽段作為抗原。通過繪制抗體稀釋度與吸光度的關系圖（圖3），估算純化抗體的滴度為1:19,300。

交叉反應性測試  

通過點樣（Dot Blot）分析測試針對H3K36me3的抗體（產品編號25250）與其他H3和H4修飾以及未修飾序列的交叉反應性。將含有相應組蛋白修飾的肽段（100至0.2 pmol）點樣于膜上，抗體稀釋度為1:20,000。圖4顯示該抗體對目標修飾具有高度特異性。

Western Blot分析  

使用針對H3K36me3的抗體（產品編號25250）對HeLa細胞的組蛋白提取物（15 ?g）進行Western Blot分析，抗體稀釋度為1:1,000，使用含有5%脫脂奶粉的TBS-Tween緩沖液。右側標記了目標蛋白的位置，左側顯示了分子量標記（單位：kDa）。

應用  

- 染色質免疫沉淀/染色質免疫沉淀測序（ChIP/ChIP-seq）：1 – 2 ?g/ChIP  

- 酶聯免疫吸附試驗（ELISA）：1:500  

- 點樣（Dot Blot，DB）：1:20,000  

- Western Blot（WB）：1:1,000  

運輸溫度：–20°C或–80°C  

物種反應性：人  

注意事項：每IP的最佳抗體用量應由最終用戶確定。建議測試1–5 ?g/IP。  

警告：避免反復凍融循環。  

科學分類：抗體  

監管狀態：僅限研究使用

BPS Bioscience是一家通過ISO 9001:2015認證的生命科學領域的供應商，公司一直致力于開發藥物研發領域的重組蛋白酶、蛋白酶活性/抑制劑篩選試劑盒和慢病毒等工具。公司由Henry Zhu博士于2005年創立，從創立至今一直致力于提供藥物研發領域的創新解決方案，以推動新的藥物發現a。公司主要關注的領域包括免疫療法、表觀遺傳學、新型冠狀病毒、CRISPR、細胞信號轉導等，主要提供激酶、磷酸二酯酶、磷酸酶、組蛋白去甲基化酶、組蛋白甲基化轉移酶、HDACs、聚ADP核糖聚合酶等。 

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