HDAC6熒光檢測試劑盒實驗前準備&結果示例

熒光法HDAC6實驗試劑盒是一個完整的實驗系統，旨在用于測量組蛋白去乙酰化酶6（HDAC6）的活性，適用于篩選和分析應用。該試劑盒采用便捷的96孔格式，包含進行100次熒光HDAC6活性測定所需的所有試劑。此外，試劑盒還包含純化的HDAC6酶和一種強效的HDAC抑制劑——TSA（Trichostatin A），用于作為陽性和陰性對照。熒光法HDAC6實驗試劑盒基于一種獨特的熒光底物和顯色劑組合。該實驗方法避免了傳統實驗中涉及的放射性、提取和色譜分析步驟。使用該試劑盒，只需在微孔板上進行兩個簡單的步驟即可分析HDAC活性水平。首先，將含有乙?；嚢彼醾孺湹腍DAC熒光底物與純化的HDAC酶孵育。去乙?；饔檬沟孜镒兊妹舾?，隨后用賴氨酸顯色劑處理時會產生熒光物質，該物質可通過熒光讀數儀進行測量。

HDAC通過催化修飾蛋白中乙酰賴氨酸的乙?；鈦碚{節細胞過程。在HDAC實驗中，熒光染料分子被連接到含有乙酰賴氨酸的肽段上。連接到肽段上會猝滅染料的熒光。經過HDAC處理后，將反應混合物與特異性針對非乙?；嚢彼岬娘@色溶液混合。如果HDAC已從賴氨酸上去除乙酰基，該溶液將釋放染料，從而允許熒光產生。因此，熒光與HDAC活性直接相關。

艾美捷HDAC6熒光檢測試劑盒（#BPQ-50076-1）應用：  

適用于研究酶動力學和篩選小分子抑制劑，用于藥物發現和高通量篩選（HTS）應用。

所需材料（但未提供）：  

0.1%溶液（1 mg/ml）的牛血清白蛋白（BSA）水溶液  

能夠在350-380 nm激發和440-460 nm檢測的熒光光度計  

可調節微量移液器及無菌吸頭  

旋轉或搖床平臺  

實驗前準備：  

1) 用HDAC實驗緩沖液將TSA（Trichostatin A）的DMSO（200 ?M）母液稀釋10倍，制成20 ?M溶液。（僅制備實驗所需的量；將剩余的TSA DMSO（200 ?M）母液分裝后在-80°C下保存）。  

2) 用HDAC實驗緩沖液將熒光HDAC底物3（5 mM）母液稀釋25倍，制成200 ?M溶液。（僅制備實驗所需的量；將剩余的5 mM母液分裝后在-80°C下保存）。  

3) 用HDAC實驗緩沖液將重組人HDAC6酶稀釋至7 ng/?l（35 ng/反應）*。將剩余的酶分裝后在-80°C下保存，稀釋后的酶需置于冰上。使用后丟棄剩余的稀釋酶。*注：最佳酶濃度可能因酶的比活性而異。

實驗結果示例：  

使用BPS Bioscience產品目錄號50076的熒光法HDAC6實驗試劑盒測量的HDAC6酶活性。熒光使用Bio-Tek熒光微孔板讀數儀測量。數據為批次特異性。

文獻參考：

1. Santo, L., et al., Blood. 2012 Mar 15;119(11):2579-89.

2. Bradner, J.E., et al., Nat Chem Biol. 2010 Mar;6(3): 238-243.