BMA Biomedicals 鈣粒蛋白 (S100A8/A9, MRP8/14) ELISA 試劑盒的準備事項

替代名稱：MRP8：S100A8，Calgranulin A，CP-10（在小鼠中）；MRP14：S100A9，Calgranulin B；Calprotectin：MRP8/14，L1，（p8,14），p34。遷移抑制因子相關蛋白（MRP）-8和-14屬于與髓系細胞分化相關的S-100家族鈣結合蛋白。它們在靜止的中性粒細胞、角質細胞（特別是在銀屑病中）、浸潤組織巨噬細胞以及活躍炎癥性疾病的上皮細胞中高度表達。慢性或急性炎癥中巨噬細胞亞群的異質性反映在MRP8和MRP14的不同表達上。表達MRP8和MRP14的吞噬細胞屬于早期浸潤細胞，而單獨的MRP8則在慢性炎癥組織中發現。MRP8、MRP14以及Ca2+依賴的MRP8/14異質復合體的部分拮抗功能使它們成為多功能的介質。

作為BMA Biomedicals在中國的區域總代理，艾美捷科技強烈推薦BMA Biomedicals熱銷產品鈣粒蛋白 (S100A8/A9, MRP8/14) ELISA 試劑盒。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

鈣粒蛋白 (S100A8/A9, MRP8/14) ELISA 試劑盒功能：

Calprotectin異質復合體的一個主要功能是其抗菌活性。Calprotectin通過與鋅的競爭來抑制病原體的生長。它還能誘導某些腫瘤細胞的凋亡。這些活性可被Zn2+和其他二價陽離子所抵消，但不會被Ca2+或Mg2+所抵消。MRP8/14異質復合體特有的另一個重要屬性是其作為脂肪酸運輸蛋白的獨特角色。依賴Ca2+的脂肪酸-MRP8/14復合體是中性粒細胞中多不飽和脂肪酸的主要載體。該復合體在靜止細胞中表達，并在受到刺激時移動到膜上。即使在生理濃度的Zn2+下，Zn2+也抑制了MRP8/14的脂肪酸載體能力，因此脂肪酸不在血液循環中運輸。這使得MRP8/14成為鈣信號和花生四烯酸效應之間的重要介質。MRP8（以及MRP8/14，但不是單獨的MRP14）在炎癥介質的刺激下分泌。它是中性粒細胞和單核細胞的強效趨化因子。然而，MRP8并不增加細胞內Ca2+，也不誘發像C5a那樣的氧化爆發和顆粒酶釋放。MRP8暴露于次氯酸鹽下，可能由活化的中性粒細胞產生，會將其轉化為不活躍的二硫鍵連接的二聚體。糖皮質激素通過炎癥介質上調MRP8的誘導。MRP8可能有助于調節胎兒-母體相互作用，這將解釋為什么在小鼠中滅活MRP8基因會導致胚胎致死。MRP14與MRP8在活化的巨噬細胞中不共表達，指向它們不同的作用。MRP14的C末端序列與中性粒細胞固定因子的N末端相同。MRP14可以被磷酸化，這增加了其Ca2+結合能力。然后它傾向于從細胞質轉移到膜和細胞骨架。已經證明MRP14與具有轉移增強能力的中性粒細胞亞群相關聯。

檢測原理：

使用一種高度特異性的單克隆抗體作為抗原捕獲，以及一種多克隆雞抗體用于檢測的一步非競爭性夾心法檢測。試劑限制在辣根過氧化物酶催化的四甲基聯苯胺顏色反應中，包括在多孔板閱讀器中450/630 nm處的停止反應和讀取。

提供的試劑：

S-1011A 即用型預涂覆并穩定的微孔板（Nunc Maxisorb）和板封口器。

S-1011B 1.5 ml的1000 ng/ml標準品，MRP8/14復合體的制劑。用測定緩沖液稀釋以獲得標準曲線所需的濃度。

S-1011C 50 μl的辣根過氧化物酶偶聯的檢測抗體。開啟前短暫離心以收集所有溶液。

S-1011D 50 ml測定緩沖液（3倍濃縮），一種含有阻斷劑和防腐劑的綠色溶液。

S-1011E 1.5 ml四甲基聯苯胺（TMB）-H2O2溶液。保持避光。

S-1011F 2×15 ml底物緩沖液（檸檬酸鉀）。

試劑盒在原始包裝中冷藏保存，自交貨之日起穩定6個月。

未提供的物料：停止溶液（1N硫酸，見下文），標準稀釋用的塑料管；移液管和帶有450 nm濾光片的微孔板閱讀器。

準備事項

嘗試估計在一個實驗中需要的各種溶液的量，并準備實際所需的體積。強烈建議對樣品和標準品進行雙重測試。讓試劑預熱至室溫，并在使用前立即準備以下稀釋液：

測定緩沖液：

用兩部分純化水稀釋濃縮的綠色儲備溶液S-1011D。示例：向15毫升儲備溶液中加入30毫升水。

樣品：

將樣品分裝存放在-20°C或更低溫度下。每個分裝只使用一次，并在適當稀釋的測定緩沖液（S-1011D）中稀釋。推薦的稀釋比例為：血清或血漿1:100；關節液1:100 - 1:10,000；呼出物、唾液、BAL和尿液1:10。

標準品：

輕輕渦旋1000 ng/ml的Calprotectin（MRP8/14）儲備溶液，準備適當稀釋如下。儲備溶液在4° - 8°C下存放時穩定六個月。

下面的測試程序使用四個標準品，濃度分別為1000、250、62.5和15.63ng/ml，這定義了一個標準曲線，適用于大多數1:100稀釋的正常血清。如有必要，調整血清稀釋比例以位于曲線的線性部分。

檢測試劑（S-1011C）：

將試劑S-1011C用測定緩沖液稀釋至1:400。示例：向10毫升測定緩沖液中加入25微升。10毫升足夠一個96孔板使用。

底物稀釋：

在使用前立即準備。在使用前將底物緩沖液（S-1011F）預熱至室溫。通過將20部分底物緩沖液與1部分TMB - H2O2溶液（S-1011E）混合來準備稀釋液。這個稀釋液應在準備后15分鐘內使用。

停止溶液：

將硫酸稀釋至1N的濃度。示例：向100毫升水中加入2.9毫升95 - 97%的硫酸（按此順序。不要將水加入酸中）。95 - 97%的濃硫酸（比重1.84）是36N。

BMA Biomedicals是瑞士的一家免疫學試劑制造商，也是提供免疫化學物質的供應商。1989年由免疫學家、生化學家和生物學家創立，主要服務/產品：單克隆和多克隆抗體的生產和衍生化的抗體；以及在炎癥、傳染病、止血、腫瘤相關疾病等，BMA 的主要專長在于抗體在免疫組織化學和酶免疫測定(ELISA)中的應用，在免疫學技術中的應用。BMA 擁有自己的設施，擁有先進的分析和生產基礎設施。專業知識在于單克隆和多克隆抗體的生產和衍生化，以及它們在免疫技術中的應用。

作為BMA Biomedicals在中國區域的代理，艾美捷科技有限公司將為中國客戶提供全面的BMA Biomedicals產品。