BMA Biomedicals 鈣粒蛋白 B，MRP14（S100A9）ELISA 試劑盒檢測原理

替代名稱：MRP8：S100A8，Calgranulin A，CP-10（在小鼠中）；MRP14：S100A9，Calgranulin B；MRP8/14：Calprotectin，L1，（p8,14），p34。

遷移抑制因子相關蛋白（MRP）-8和-14屬于與髓系細胞分化相關的S-100鈣結合蛋白家族。它們在靜止的中性粒細胞、角質形成細胞（特別是銀屑?。?、浸潤組織巨噬細胞和活動性炎癥疾病中的上皮細胞中高度表達。巨噬細胞亞群在慢性或急性炎癥中的異質性反映在MRP8和MRP14的不同表達上。表達MRP8和MRP14的吞噬細胞屬于早期浸潤細胞，而MRP8單獨存在于慢性炎癥組織中。MRP8、MRP14和Ca2+依賴性MRP8/14異質復合物的部分拮抗作用使其成為多功能介質。

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鈣粒蛋白 B，MRP14（S100A9）ELISA 試劑盒測試原理：

一步非競爭性夾心法，試劑限制在辣根過氧化物酶催化的四甲基聯苯胺顏色反應中，包括停止反應和在多孔板閱讀器中450/630nm處的讀取。提供的試劑：

S-1008A：即用型預涂覆并穩定的微孔板 + 微孔板封口器（各1個）。

S-1008B：500ng標準品，一種穩定的凍干重組MRP14制劑。

S-1008D*：3倍濃縮的測定緩沖液，輕微渾濁的藍色溶液。

S-1008E：0.48%四甲基聯苯胺，0.18% H2O2在乙醇/丙酮9:1中。保持避光。

S-1008F*：TMB底物緩沖液（檸檬酸鉀）。

S-1008R*：試劑混合物：兩瓶1.1ml（每瓶）的混合物，包括HRPO偶聯的檢測抗體，11倍濃縮。

所有標有星號()的液體溶液都含有0.1%（體積/體積）的Kathon CG作為防腐劑。

該試劑盒在冷藏條件下至少穩定至標示日期。

未提供的物料：停止溶液（1N硫酸，見下文），用于稀釋的塑料管；用于洗滌的等滲鹽水，移液管，重復移液管，8通道移液管（2個），微孔板洗滌器和閱讀器（450nm/630nm濾光片）。

開始測試前的準備：在開始之前，讓所有試劑預熱至室溫，特別是干燥的預涂覆板。強烈建議對樣品和標準品進行雙重測試。在開始測試之前，除了TMB底物溶液外，準備所有以下稀釋：

預涂覆板

將干燥的預涂覆板（或將用于測試的條數）從冷藏中取出，覆蓋并在室溫或37°C下孵育2小時。

測定緩沖液

將1份隨附的濃縮液（S-1008D）與2份蒸餾水混合，以獲得測定緩沖液。示例：測量15ml濃縮液并加入30ml水。

標準品：

用1.0ml測定緩沖液溶解凍干標準品。用渦旋器徹底渦旋數次，每次10秒，并在之間孵育幾分鐘。這個500ng/ml的標準品現在已準備好進一步稀釋。如果需要，將未使用的標準品部分存放在-20°C以備后用。

稀釋：

用“50”、“12.5”、“3.13”、"0.78" 和 "0.2" 標記五個1.5ml聚丙烯管。

向“50”管中加入450μl測定緩沖液，向其他四個管中加入360μl測定緩沖液。

向“50”管中加入50μl的500ng/ml庫存溶液并充分混合。

從“50”溶液中取出120μl加入“12.5”管中，充分混合，并繼續按遞減順序進行其他管的連續稀釋，總是向下一個較低濃度的管中加入120μl。這給出了五個標準溶液，用于生成帶有雙重標準的標準曲線。 試劑混合物（工作稀釋） 將1份隨附的試劑混合物（S-1008R）與10份測定緩沖液混合。示例：如果你處理包含32個孔的四條帶，向3.2ml測定緩沖液中加入0.32ml試劑混合物。根據你的需求調整這個體積。 樣品： 將樣品分裝存放在-20°C或更低溫度。只使用一次分裝，并在適當稀釋的測定緩沖液中稀釋你的樣品。我們推薦正常血清或血漿的稀釋比例為1:5；關節液為1:20 - 1:1000；呼出物、唾液、BAL和尿液為1:2。示例：在臺式離心機中離心你的血清樣本5分鐘，然后向400μl測定緩沖液中加入100μl。

BMA Biomedicals是瑞士的一家免疫學試劑制造商，也是提供免疫化學物質的供應商。1989年由免疫學家、生化學家和生物學家創立，主要服務/產品：單克隆和多克隆抗體的生產和衍生化的抗體；以及在炎癥、傳染病、止血、腫瘤相關疾病等，BMA 的主要專長在于抗體在免疫組織化學和酶免疫測定(ELISA)中的應用，在免疫學技術中的應用。BMA 擁有自己的設施，擁有先進的分析和生產基礎設施。專業知識在于單克隆和多克隆抗體的生產和衍生化，以及它們在免疫技術中的應用。

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