Biogradetech Sphingomyelin 瓊脂糖珠：在鞘磷脂研究中的應用

脂質包被珠被設計用于蛋白質下拉實驗。用于檢測純化蛋白質、細胞裂解物中蛋白質的脂質結合，或放射性標記的體外翻譯產物的結合。

鞘磷脂珠由瓊脂糖組成，每1mL珠含有10納摩爾的結合鞘磷脂，足以進行幾次蛋白質結合實驗。每1mL訂單包括少量對照珠。更多數量的控制珠也可供購買。

作為Biogradetech獨家代理，艾美捷科技強烈推薦Biogradetech熱銷產品 Sphingomyelin 瓊脂糖珠。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

鞘磷脂是一種重要的生物脂質，廣泛存在于細胞膜中，參與多種細胞生理過程。瓊脂糖珠是一種常用于分子生物學實驗的工具，用于DNA、RNA和蛋白質的分離和純化。Sphingomyelin 瓊脂糖珠通過將鞘磷脂分子固定在瓊脂糖珠表面來制備。這種固定可以是通過共價鍵或非共價相互作用實現的。制備好的珠粒具有高度的特異性和親和力，能夠高效地從復雜樣品中捕獲鞘磷脂分子。

脂質珠TM測定注意事項：

脂質包被珠有1 mL和0.1 mL兩種規格，以1X PBS緩沖液中的50%漿液形式提供。

訂購1 mL的產品會附帶200 ?L的對照珠。對照珠也可單獨購買，建議使用它們進行分析。

儲存在2-8°C。產品對溫度和光線敏感，請勿冷凍。

以1,000 x g或更低的速度離心珠。不要高速離心珠，因為這可能會壓碎珠。

每1 mL珠中有總計10毫摩爾的結合脂質。

珠的直徑范圍在45-165微米之間。

對每種蛋白質使用50-100 ?L的50%漿液脂質包被珠和對照珠。

了解陽性對照蛋白列表。

脂質珠^TM - 蛋白質拉下協議：

我們提供以下協議作為指南，并強烈鼓勵研究人員查閱科學文獻并進行優化實驗，以確定對其感興趣的蛋白質最有利的條件。

充分混合珠（不要渦旋）。將50-100 ?L的50%珠漿液轉移到0.5-1.5 mL的管中。

以1,000 x g或更低的速度離心珠以沉淀。小心移除上清液，避免丟失珠。

用洗滌緩沖液的10倍過量洗滌珠。輕輕混合，孵育1-2分鐘。重復洗滌步驟兩次。

小心移除洗滌上清液，并將珠在含有您的蛋白質的結合緩沖液中重新懸浮。 a. 對于純化的蛋白質，使用1-10 ?g的蛋白質，用足夠的結合緩沖液稀釋形成50%脂質珠漿液。 b. 對于細胞裂解物、提取物、亞細胞組分：使用大約1 mg的總蛋白質對1 mL結合緩沖液。將整個1 mL準備好的樣品加入到您洗滌過的珠中。

將蛋白質-珠溶液孵育1-3小時。孵育可以在室溫或4°C下進行，取決于您蛋白質的穩定性。需要連續運動以保持珠懸浮。

沉淀珠并小心移除上清液。如果需要，上清液可以用來監測未結合的蛋白質。

用洗滌緩沖液的10倍過量洗滌珠。輕輕混合，孵育1-2分鐘。重復洗滌步驟五次。如果您選擇在結合緩沖液中使用牛血清白蛋白（BSA），請確保在進入下一步之前將其徹底洗出。

在最后一次洗滌后，通過向珠中加入等體積的2X Laemmli樣品緩沖液（或類似物）并加熱至70°C 10分鐘來洗脫結合的蛋白質。

加熱后，沉淀珠并移除上清液。將上清液儲存在4°C下，直到分析。丟棄珠。

蛋白質可以通過SDS-PAGE分離，并通過凝膠的Coomassie藍染色、蛋白質轉移和免疫印跡檢測感興趣的蛋白質，或進行自顯影。

文獻參考：

1) Nair, S., et al. (2016). “Clonal Immunoglobulin against Lysolipids in the Origin of Myeloma.” New England Journal of Medicine 374(6): 555-561.

Biogradetech成立于2015年，總部位于美國加利福尼亞州，早期以產品技術研發服務起家，逐步發展了廣泛的產品線，并將其商業化銷售，包括蛋白質、抗體、酶、培養基、試劑盒和儀器。適用于細胞生物學、蛋白質組學、分子生物學、免疫學、微生物學、診斷學、生物化學、神經科學、血液分析和高通量藥物篩選等領域。