【神經營養因子專題】BDNF檢測哪家強，Scientific Report告訴您

神經營養因子是一類對神經元的發育、存活和凋亡起重要作用的蛋白質，其成員包括神經生長因子（NGF），腦源性神經營養因子(BDNF)，神經營養因子3(NT-3)，神經營養因子4(NT-4)等，這些蛋白質是治療神經損傷等疾病的潛在藥物標靶。

生物標記物用于支持診斷或檢測治療效果是神經病學和神經精神病領域尚未滿足的主要臨床需求。盡管已經發表了大量關于腦疾病與生物液體中存在的分子標記物之間關系的研究，但只有少數臨床上有用的生物標記物被成功地驗證用于常規臨床實踐。

腦源性神經營養因子（BDNF）是腦疾病中最有前景的生物標志物之一，但目前尚缺乏確切的臨床驗證。BDNF是一種分泌性的二聚體生長因子，存在于大多數人體組織中，包括大腦和血液。已知BDNF對特定神經元種群發育過程中的存活和分化以及成年期神經元網絡的維持和可塑性中起著重要作用。與其他神經營養素類似，BDNF首先被合成為一種32 kDa的前體蛋白，稱為的前體BDNF，然后被不同的蛋白酶剪切，產生14 kDa的成熟形式或28 kDa的截短形式。有趣的是，人體內不同形式BDNF的動態改變與認知障礙和精神紊亂有著密切的關系。

腦源性神經營養因子（BDNF）作為一種潛在的生物標志物，越來越受到人們的關注，以支持對腦疾病的診斷或監測治療效果。循環的BDNF可在血清、血漿或全血中測定。然而，由于樣品采集和BDNF分析方法的多樣性，導致結果的再現性較差，限制了BDNF作為生物標志物的使用。

為了克服這些局限性，Alessio等人使用40名健康成人的血清，比較了市面上常見的五種ELISA測定試劑盒（Aviscera Bioscience、Biosensis、Millipore ChemiKine（^TM）、Promega Emax（^®）、R&D-System-Quantikine（^®））和一種多重分析（Millipore Milliplex（^®））對人血清中BDNF的檢測效果。所有試劑盒均顯示100%樣品回收率，然而，它們在5%到20%之間表現出非常不同的分析間差異。實際實驗結果顯示的組間差異高于制造商公布的組間差異，只有Biosensis例外，它具有最佳的總體性能。斑點雜交分析顯示，其中兩個試劑盒選擇性地識別成熟的BDNF，而其他試劑盒同時與前體BDNF和成熟的BDNF反應。具體的實驗結果如下：

不同廠家BDNF ELISA試劑盒公布的性能與實際檢測的性能的比較

圖1. 兩次不同時間重復測定，組間差異如圖所示，Biosensis的試劑盒變異系數最?。?%）

圖2. 三次不同時間重復測定，Biosensis試劑盒變異系數(CV)最?。?0%），且各獨立測定間差異不顯著。

圖3

A：檢測每個ELISA試劑盒中的抗體對Pro-BDNF和mature-BDNF的特異性（Sigma抗體作為對照）

B：A中Pro-BDNF和mature-BDNF印跡區域的放大

C：Biosensis、Promega Emax®PAB和Sigma的抗體在斑點雜交上的反應性

結果顯示：Biosensis、Promega Emax®PAB兩個試劑盒選擇性地識別mature-BDNF，而其他試劑盒同時與pro-BDNF和mature-BDNF反應。

圖4. 各品牌BDNF檢測ELISA實際總體性能比較

每個試劑盒在分析內差異、分析間差異、檢測范圍、靈敏度和處理時間五個方面的性能如圖4所示。六個試劑盒中，對于分別檢測總BDNF和成熟的BDNF而言， Biosensis和Aviscera-Bioscience表現最為突出，顯示五個參數值的最大面積接近的100%（上圖）。尤其是Biosensis，即使在第三次重復后（10%）的變異系數最低，三次獨立測量之間也沒有顯著差異。

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Scientific Report專題文章賞析：

A method for reproducible measurements of serum BDNF: comparison of the performance of six commercial assays. Sci Rep. 2015; 5: 17989.

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