染色步驟丨Calcein-AM/PI，活細胞/死細胞雙染試劑盒

Calcein-AM/PI，活細胞/死細胞雙染試劑盒Calcein, AM 是一種可對活細胞進行熒光標記的細胞染色試劑，它穿透細胞膜進入細胞后被細胞內的酯酶剪切形成 Calcein，從而被滯留在細胞內，發出強綠色熒光。

與其它同類試劑（如 BCECF, AM 和 CFDA）相比，Calcein, AM 的細胞毒性很低。Calcein 的激發和發射波長分別為 490 nm 和 515 nm。Calcein, AM 僅對活細胞染色。

作為核染色染料的 PI 不能穿過活細胞的細胞膜，它穿過死細胞膜的無序區域而到達細胞核，并嵌入細胞的 DNA 雙螺旋從而產生紅色熒光（激發：535nm，發射：617 nm），因此 PI 僅對死細胞染色。由于 Calcein 和 PI-DNA 都可被 490 nm 激發，因此可用熒光顯微鏡同時觀察活細胞和死細胞。用 545 nm 激發，僅可觀察到死細胞。由于不同細胞系的最佳染色條件不同，我們建議個別確定 Calcein, AM 和 PI的合適濃度。

艾美捷 Biogradetech Calcein-AM/PI，活細胞/死細胞雙染試劑盒：

中文名稱：Calcein-AM/PI，活細胞/死細胞雙染試劑盒

英文名字：Calcein-AM/PI, Live/Dead Cell Double Staining Kit

Biogradetech貨號：B-CHK103-500T

規格：500T

保存建議：Calcein-AM/PI，活細胞/死細胞雙染試劑盒保存：-20℃干燥避光 有效期一年。

圖1.Calcein-AM/PI細胞雙染試劑盒染色案例（左圖：Calcein-AM染FTC細胞（活細胞單染）中圖：PI染HCT116細胞（死細胞單染）右圖：Calcein-AM、PI染MHD-1 細胞（活死細胞雙染））

Calcein-AM/PI，活細胞/死細胞雙染試劑盒染色步驟：

1、 用Trypsin-EDTA消化細胞。

2、 通過離心收集細胞（1,000 rpm，3 min）。

3、 去除上清液，加入PBS（-）制備細胞懸液（105 - 106 cells/ml為宜）。

4、 重復步驟2和步驟3數次以消除培養基中的酯酶活性。

5、 取100 μl 染色工作液與200 μl 細胞懸液混合，在37℃培養15 min。

6、 在490±10 nm激發波長下同時觀察黃綠色熒光的活細胞和紅色熒光的死細胞。另外用545 nm激發波長單獨觀察死細胞。