ALPCO 馬IgG ELISA試劑盒的樣品收集和處理方法

IgG檢測試劑盒是一種高靈敏度的雙位點酶聯免疫測定法（ELISA），用于定量馬血漿和血清樣本中免疫球蛋白G（IgG）的測定。用于研究用途只有。不用于診斷程序。

作為ALPCO在中國的區域總代理，艾美捷科技強烈推薦ALPCO熱銷產品馬IgG ELISA試劑盒。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

馬IgG ELISA試劑盒檢測原理：

雙抗體夾心ELISA的原理如圖1所示。在該檢測方法中，樣本中的IgG與吸附在聚苯乙烯微量滴定板表面的抗IgG抗體發生反應。洗滌后去除未結合的蛋白質，隨后加入與辣根過氧化物酶（HRP）偶聯的抗IgG抗體。這些酶標記的抗體與之前結合的IgG形成復合物。再次洗滌后，通過加入色原底物3,3’,5,5’-四甲基聯苯胺（TMB）來檢測結合在免疫吸附劑上的酶。結合的酶量與樣本中IgG的濃度成正比；因此，在450 nm處的吸光度反映了測試樣本中IgG的濃度。測試樣本中IgG的量可以通過從標準曲線中插值得到，該標準曲線由標準品構建并根據樣本稀釋度進行校正。

需要但未提供的材料

? 精密移液管（2?L至1000?L）用于制備和分配稀釋液

? 試管

? 噴壺或微孔板洗滌器/吸液器

? 蒸餾水或去離子水

? 微孔板讀數儀

? 各種玻璃器皿用于制備試劑和緩沖溶液

? 計時器

? 抗凝劑（用于血漿樣品收集）

? 離心機

樣品收集和處理

所有血液成分和生物材料都應視為潛在的危險物質。處理和處置時應遵循通用預防措施。

如果血樣凝塊、明顯溶血、混濁或樣品完整性值得擔憂，請做好記錄，并謹慎解讀結果。

以下列出的樣品采集和存儲條件僅供參考。樣品穩定性尚未評估。

? 血清樣品：應通過靜脈采血收集血液。凝固后應通過離心將血清與細胞分離。立即進行檢測或分裝并存儲樣品在-80°C（首選）或-20°C。避免重復凍融循環。

? 血漿樣品：血液應收集到帶有抗凝劑的容器中然后離心。立即進行檢測或分裝并存儲樣本在-80°C（首選）或-20°C。避免重復凍融循環。

? 已知干擾物質：濃度高于0.1%的偶啶和硫黃汞均會抑制酶反應。

樣品稀釋

該測定要求每個測試樣品在使用前必須稀釋。每次進行測定時，所有樣品均應重復檢測。推薦的稀釋僅供參考。稀釋應基于未知樣品的預期濃度，以使稀釋樣品在標準曲線的動態范圍內。如果不確定樣品值，建議先進行代表性樣品的串聯稀釋檢測，然后再運行整個孔板。

? 血清和血漿樣品-推薦的起始稀釋為1:200,000。要準備1:200,000的樣品稀釋，將2?L樣品轉移至1998?L的1倍稀釋液中。這樣，您獲得1:1,000的稀釋。然后通過將2?L轉移到398?L的1倍稀釋液中進行稀釋。這樣，您獲得1:200,000的稀釋。每個階段均要充分混合。

試劑制備

? 在使用前將所有試劑室溫（16°C至25°C）恢復。

? 稀釋液濃縮液-提供的稀釋液溶液為5倍濃縮液，必須與蒸餾水或去離子水按1:5稀釋（1部分緩沖液濃縮物，4部分dH2O）。

? 洗滌液濃縮液-提供的洗滌液是20倍濃縮液，必須與蒸餾水或去離子水按1:20稀釋（1部分緩沖液濃縮物，19部分dH2O）。當存儲溫度較低時，濃縮物中可能出現結晶。未稀釋前將濃縮物加熱至30-35°C，可溶解結晶。

? 酶-抗體復合物-通過將10?L酶-抗體共軛物加入到990?L 1倍稀釋液中為每個微孔板測試帶計算所需的工作共軛溶液。立即稀釋使用，并遠離光線。均勻但輕柔地混合。避免起泡。

? 預包被ELISA微孔板-如供應的那樣隨用隨用。解封箔袋并取出板。取出不會在測試中使用的所有條和孔，放回到袋子中重新密封以及干燥劑。

? 馬IgG校準物-按照特定批次的分析證書準備。

ALPCO產品種類多樣，可測樣品來源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、豬、羊、狗、猴等，涉及神經生物學、骨代謝、心血管疾病和氧化應激、細胞因子與信號轉導、糖尿病和肥胖癥、內分泌學、甲狀腺功能、腸胃病學、免疫學、生殖激素、抗體和抗原、分子診斷等多個研究領域，尤以糖尿病和肥胖癥研究領域見長。

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