ALPCO 抗Sm/RNP-C（IgG）ELISA檢測原理&步驟

抗Sm/RNP-C（IgG）ELISA是一種固相酶免疫測定法，用于定量和人血清中抗snRNP復合物抗體的定性檢測。該測定采用從細胞系HeLa高度純化的天然人U1 snRNP復合物。這個U1 snRNP復合物包含Smith抗原（Sm）和RNPs，70 kDa U1特異性蛋白加上蛋白質A和C。該檢測是研究混合結締組織疾病的工具（MCTD）和系統性紅斑狼瘡（SLE）。僅供研究使用。不用于診斷程序。

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抗Sm/RNP-C（IgG）ELISA檢測原理：

血清樣本稀釋至1:101后，在涂有特定抗原的微孔板中孵育。

如果樣本中存在抗體，它們會與抗原結合。未結合的部分在隨后的步驟中被洗掉。

然后，與辣根過氧化物酶（HRP）結合的抗人免疫球蛋白孵育，并與微孔板中樣本的抗原-抗體復合體反應。

未結合的結合物在隨后的步驟中被洗掉。加入TMB底物會產生酶促比色（藍色）反應，通過稀釋酸停止反應（顏色變為黃色）。

色素的色度形成速率是與抗原-抗體復合體結合的結合物的量的功能，這與樣本中相應抗體的初始濃度成正比。

儲存和保質期

將所有試劑和微孔板存放在2-8°C/35-46°F的條件下，使用原裝容器。一旦配制好，重組溶液在2-8°C/35-46°F下穩定1個月。試劑和微孔板應在每個組件上標明的有效期內使用。避免TMB底物強烈暴露于光線下。將微孔板存放在指定的鋁箔中，包括干燥劑，并密封緊固。

樣本收集、處理和儲存

最好使用新鮮收集的血清樣本。采血必須遵循國家要求。不要使用黃疸、脂血、溶血或細菌污染的樣本。含有顆粒的血清應通過低速離心（<1000 xg）清除。血液樣本應收集在干凈、干燥、空的試管中。

分離后，血清樣本應在最初的8小時內使用，或在2-8°C/35-46°F下緊閉存放最多兩天（48小時），或在-20°C/4°F下冷凍保存更長時間。

檢測步驟

1. 在移液之前確保已完成步驟7.1的準備工作。

2. 根據所需的定量/定性結果，按照以下步驟操作：

3. 按照第7.2節的描述，將100 ?L的以下物質移入指定的微孔中：

a. 校準品（Cal A至Cal F）用于定量或

b. 截止校準品（CC）用于定性

以及以下每種100 ?L：

c. 陰性對照（NC）和陽性對照（PC）

d. 稀釋的血清樣本（S1, S2…）

4. 在20-32°C/68-89.6°F下孵育30分鐘。

5. 用300 ?L的洗滌緩沖液（稀釋1:50）洗滌3次。

6. 向每個孔中移入100 ?L的結合物。

7. 在20-32°C/68-89.6°F下孵育30分鐘。

8. 用300 ?L的洗滌緩沖液（稀釋1:50）洗滌3次。

9. 向每個孔中移入100 ?L的TMB底物。

10. 在20-32°C/68-89.6°F下孵育30分鐘，避免強烈光線照射。

11. 按照加入底物的相同順序，向每個孔中移入100 ?l的終止溶液。

12. 至少孵育5分鐘。

13. 輕輕搖動板子5秒鐘。

14. 在30分鐘內讀取450 nm（可選450/620 nm）的吸光度。

文獻參考：

1. Peter JB, Shoenfeld Y (1996). Autoantibodies. Elsevier. Sciences B.V., Amsterdam.

2. Hackl W, Fischer U, Luhrmann R (1994). A 69 kD protein that associates reversibly with the Sm core domain of several splicosomal snRNP species. J Cell Biol 124: 261-272.

3. Klein Gunnewiek JMT, Van de Putte LBA, van Venrooij WJ (1997). The U1 snRNP complex: An autoantigen in connective tissue diseases: An update. Clin Exp Rheumatol 15: 549-560.

4. Von Mühlen CA, Tan EM (1995). Autoantibodies in the diagnosis of systemic rheumatic diseases. Semin Arthritis Rheum 24: 323-358. 

ALPCO產品種類多樣，可測樣品來源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、豬、羊、狗、猴等，涉及神經生物學、骨代謝、心血管疾病和氧化應激、細胞因子與信號轉導、糖尿病和肥胖癥、內分泌學、甲狀腺功能、腸胃病學、免疫學、生殖激素、抗體和抗原、分子診斷等多個研究領域，尤以糖尿病和肥胖癥研究領域見長。

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