ALPCO CeliCheck（組織轉谷氨酰胺酶IgA/IgG）ELISA測定程序說明

CeliCheck（組織轉谷氨酰胺酶IgA/IgG）ELISA是一種固相酶免疫測定法，用于定量和定性檢測人血清中針對組織轉谷氨酰胺蛋白酶（tTG）新表位的IgA和IgG抗體。采用與醇溶蛋白特異性肽交聯的人重組tTG的檢測顯示了tTG的新表位，這確保了檢測的分析靈敏度和特異性顯著提高。

作為ALPCO在中國的區域總代理，艾美捷科技強烈推薦ALPCO熱銷產品CeliCheck（組織轉谷氨酰胺酶IgA/IgG）ELISA。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

CeliCheck（組織轉谷氨酰胺酶IgA/IgG）ELISA檢測原理：

將1:101稀釋的血清樣本在涂有特異性抗原的微孔板中孵育。樣本中的抗體與抗原結合。在以下步驟中洗掉未結合的部分。然后，將與辣根過氧化物酶結合的抗人免疫球蛋白孵育，并與微孔板中樣品的抗原-抗體復合物反應。在接下來的步驟中洗掉未結合的共軛物。添加TMB底物會產生無酶比色（藍色）反應，該反應被稀酸阻止（顏色變為黃色）。發色團顏色形成的強度是結合到抗原-抗體復合物上的結合物的量的函數，這與樣品中相應抗體的初始濃度成正比。

測定程序

1 開始前的準備

試劑準備：

稀釋濃縮試劑：

- 將濃縮樣本緩沖液按1:5的比例用蒸餾水稀釋（例如20毫升加80毫升）。

- 將濃縮洗滌緩沖液按1:50的比例用蒸餾水稀釋（例如20毫升加980毫升）。

為避免錯誤，建議標記不同校準液的瓶蓋。

樣本準備：

將血清樣本按1:101的比例用樣本緩沖液（1x）稀釋，例如1000微升樣本緩沖液（1x）+ 10微升血清。

混合均勻！

洗滌：

- 每8個孔準備20毫升稀釋洗滌緩沖液（1x），或96孔則準備200毫升，例如4毫升濃縮液加196毫升蒸餾水。

自動洗滌：

- 考慮設置儀器和機器人移液管死體積所需的額外體積。

手動洗滌：

- 將孔中的液體倒置板子倒掉。將微孔板框架孔朝下在干凈的吸水紙上用力敲擊。

- 向每個孔中移液300微升稀釋洗滌緩沖液，等待20秒。再次重復整個程序兩次。

微孔板：

- 計算測試所需的孔數。從框架中移除未使用的孔，放回提供的塑料袋中，與干燥劑一起密封存放（2-8°C/35-46°F）。

使用通用指南

如果產品信息（包括標簽）有缺陷或錯誤，請聯系ALPCO。不要混合或替換不同批號的對照品、校準液、結合物或微孔板。這可能會導致結果變化。使用前讓所有組分達到室溫（20-32°C/68-89.6°F），混合均勻，并遵循推薦的孵育方案以獲得最佳測試性能。孵育：建議在30°C/86°F下進行自動化系統的測試。不要將組分暴露在高于37°C/98.6°F的溫度下。始終使用全新的移液管頭吸取底物溶液。保護這種試劑不受光線照射。永遠不要使用與其他試劑一起使用過的移液管頭吸取結合物。

樣本收集、處理和儲存

優先使用新鮮收集的血清樣本。采血必須遵循國家要求。不要使用溶血、脂血、黃疸或細菌污染的樣本。含有顆粒的血清應通過低速離心（<1000 xg）清除。血液樣本應收集在干凈、干燥、空的試管中。分離后，血清樣本應在最初8小時內使用，或緊閉存放在2-8°C/35-46°F下最多48小時，或在-20°C/-4°F下冷凍以保存更長時間。

文獻參考：

1. Dietrich W, Ehnis T, Bauer M, Donner P, Volta U, Riecken EO, Schuppan D (1997).Identification of tissue transglutaminase as the autoantigen of celiac disease. Nat Med1997; 3: 797-801.

2. Dietrich W, Laag E, Sch?pper H, Volta U, Ferguson A, Gillett H, Riecken EO, SchuppanD (1998). Autoantibodies to tissue transglutaminase as predictors of celiac disease.Gastroenterology 1998; 115: 1317-1321.

3. M?ki M, Collin P (1997). Coeliac disease. Lancet 1997 349: 1755-1759.4. Shan L, Molberg O, Parrot I, Hausch F, Filiz F, Gray GM, Sollid LM, Khosla C (2002).Structural basis for gluten intolerance in Celiac Sprue. Science 297: 2275-2279.

ALPCO產品種類多樣，可測樣品來源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、豬、羊、狗、猴等，涉及神經生物學、骨代謝、心血管疾病和氧化應激、細胞因子與信號轉導、糖尿病和肥胖癥、內分泌學、甲狀腺功能、腸胃病學、免疫學、生殖激素、抗體和抗原、分子診斷等多個研究領域，尤以糖尿病和肥胖癥研究領域見長。

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