ALPCO 總甲狀腺素ELISA（總T4 ELISA）：提高檢測準確性和重復性的策略

用于定量測定人血清中總甲狀腺素（T4）濃度。僅供研究使用。不用于診斷程序。

作為ALPCO在中國的區域總代理，艾美捷科技強烈推薦ALPCO熱銷產品 總甲狀腺素ELISA（總T4 ELISA）。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

 總甲狀腺素ELISA（總T4 ELISA）檢測原理：

在T4酶免疫測定（EIA）中，微孔板孔上包被了一定量的抗T4抗體。將一定量的樣本和一定量的與辣根過氧化物酶結合的T4添加到微孔板孔中。在孵育過程中，T4和結合的T4競爭抗T4抗體上的有限結合位點。在室溫下孵育60分鐘后，用水潤洗孔5次以去除未結合的T4結合物。然后加入TMB試劑溶液并孵育20分鐘，導致藍色出現。通過加入停止溶液停止顏色發展，然后在450nm處用分光光度計測量吸光度。形成的色度強度與存在的酶量成正比，與樣本中未標記T4的量成反比。通過參考以同樣方式測定的一系列T4標準品，可以定量未知樣本中T4的濃度。

測定程序

1. 將所需數量的包被孔固定在支架中。

2. 將25?L的標準品、樣本和對照品（未包含）移液至相應的孔中。

3. 向每個孔中加入100 ?L的工作結合試劑。

4. 徹底混合30秒。完全混合非常重要。

5. 在室溫（18-25°C）下孵育60分鐘。

6. 將孵育混合物通過甩動板子內容物到廢物容器中移除。

7. 用蒸餾水沖洗微孔板5次，并甩動。

8. 將孔猛擊在吸水紙或紙巾上，以去除所有殘留水滴。

9. 向每個孔中分發100?L的TMB試劑。輕輕混合10秒。

10. 在室溫下，避光孵育20分鐘。

11. 通過向每個孔中加入100?L的停止溶液來停止反應。

12. 輕輕混合30秒。確保所有的藍色完全變為黃色。

13. 在15分鐘內使用微孔板讀取器讀取450nm的吸光度。

結果計算

1. 計算參考標準、對照品和樣本的重復組的平均吸光度值（OD450）。

2. 通過在對數-對數坐標紙上繪制每個參考標準的平均吸光度與其濃度（?g/dL）的標準曲線，吸光度在垂直（y）軸上，濃度在水平（x）軸上。

3. 使用每個樣本的平均吸光度值，從標準曲線上確定相應的T4濃度（?g/dL）。

標準曲線示例：

下面展示了一個典型的標準運行結果，其中450納米處的光密度讀數顯示在Y軸上，而總T4濃度（?g/dL）顯示在X軸上。注意：標準曲線僅供說明之用，不應用來計算未知值。每個實驗室必須為每次測定運行提供自己的數據和標準曲線。

ALPCO產品種類多樣，可測樣品來源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、豬、羊、狗、猴等，涉及神經生物學、骨代謝、心血管疾病和氧化應激、細胞因子與信號轉導、糖尿病和肥胖癥、內分泌學、甲狀腺功能、腸胃病學、免疫學、生殖激素、抗體和抗原、分子診斷等多個研究領域，尤以糖尿病和肥胖癥研究領域見長。

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