ALPCO Bi-CAT（研究）ELISA：高靈敏度腎上腺素和去甲腎上腺素定量檢測方法

Bi-CAT酶免疫分析是一種用于定量測定腎上腺素（epinephrine）和去甲腎上腺素（norepinephrine）的酶免疫分析方法。該試劑盒是一個靈活的測試系統，適用于各種生物樣本類型和體積。僅供研究使用，不用于診斷程序。腎上腺素和去甲腎上腺素通過使用特定的親和凝膠進行提取，然后進行?；幚?，并最終通過酶促反應轉化。競爭性ELISA試劑盒采用微孔板格式，其中抗原與微孔板的固態相綁定。經過?；幚淼臉藴势贰φ掌?、樣本與固態相綁定的分析物競爭有限的抗體結合位點。系統達到平衡后，通過洗滌步驟去除未結合的抗原和抗原-抗體復合物。使用以TMB為底物的抗兔IgG-過氧化物酶結合物檢測與固態相綁定的抗體，產生顏色反應。該反應在450nm處進行監測。通過與已知標準濃度的標準曲線比較，實現對未知樣本的定量。建議手動處理ELISA，并由用戶負責驗證自動化實驗室設備的準確性。

作為ALPCO在中國的區域總代理，艾美捷科技強烈推薦ALPCO熱銷產品Bi-CAT（研究）ELISA。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

Bi-CAT（研究）ELISA程序注意事項、指南和警告

(1) 本試劑盒僅供專業人士使用。用戶應充分理解本協議，以成功使用本試劑盒。只有試劑盒附帶的測試說明書有效，必須使用該說明書進行測試。只有嚴格遵守和仔細遵循所提供的說明書，才能獲得可靠的性能。

(2) 必須遵循良好實驗室規范（GLP）的原則。

(3) 為減少接觸潛在有害物質，必要時請穿實驗服、戴一次性手套和護目鏡。

(4) 所有試劑盒試劑和樣本在使用前應放置至室溫，并輕輕但徹底混合。避免試劑和樣本反復凍融。

(5) 稀釋或重組時，請使用去離子水、蒸餾水或超純水。

(6) 微孔板含有易折斷的條。未使用的孔必須存放在2-8°C的密封鋁箔袋中，并在使用時放在提供的框架中。從框架中取出的條應標記，以避免混淆。

(7) 強烈建議進行雙重樣本測量，以幫助識別任何移液錯誤。

(8) 一旦開始測試，必須不間斷地完成所有步驟。確保所需的試劑、材料和設備在適當的時間準備就緒。

(9) 孵育時間會影響結果?？椎奶幚響凑障嗤捻樞蚝蜁r間間隔進行。

(10) 為避免試劑交叉污染，請使用新的一次性移液器槍頭分配每種試劑、樣本、標準品和對照品。

(11) 每次運行都必須建立標準曲線。

(12) 每次運行都應包括對照品，并且必須在建立的置信限內。置信限列在QC報告中。

(13) 不要在測試中混合不同批號的試劑盒組分，不要使用試劑盒標簽上顯示的過期日期之后的試劑。

(14) 避免接觸含有0.25 M H2SO4的停止液。它可能會引起皮膚刺激和灼傷。如果接觸到眼睛或皮膚，請立即用水沖洗。

(15) TMB底物對皮膚和粘膜有刺激性。如果可能接觸到，請用大量水沖洗眼睛，用肥皂和大量水清洗皮膚。在重復使用之前清洗受污染的物品。

(16) 有關試劑盒中包含的危險物質的信息，請參考安全數據表（SDS）。該試劑盒的安全數據表可直接在ALPCO網站上獲得或根據要求提供。

(17) 試劑盒試劑必須視為危險廢物，并根據當地和國家法規進行處理。

(18) 如果試劑盒或組件有任何嚴重損壞，必須在收到試劑盒后一周內書面通知ALPCO。嚴重損壞的單個組件不得用于測試運行。它們必須妥善存放，直到做出決定。如果決定它們不再適合測量，必須按照當地和國家法規進行處理。

結果計算

通過繪制標準品的吸光度讀數（計算平均吸光度，線性，y軸）與相應的標準品濃度（對數，x軸）的圖，可以得到用于確定樣品中濃度的標準曲線，標準A的濃度為0.001 ng/mL。由于數據以對數形式呈現，這種對齊是強制性的。使用非線性回歸進行曲線擬合（例如4參數，Marquardt算法）。這項檢測是一種競爭性檢測。這意味著：隨著分析物濃度的增加，OD值會降低。在標準曲線下方發現的OD值對應于樣品中分析物的高濃度，必須報告為陽性。從標準曲線上取得的樣品濃度必須乘以一個校正因子。

校正因子 = 20 ?L（提取的標準品體積）/ 提取的樣品體積（?L）

例如：提取了750 ?L的樣品。從標準曲線上得到濃度為0.15 ng/mL的去甲腎上腺素。

校正因子 = 20/750 = 0.027

樣品濃度 = 0.15 ng/mL x 0.027 = 0.004 ng/mL = 4 pg/mL 去甲腎上腺素

轉換

腎上腺素 (ng/mL) x 5.46 = 腎上腺素 (nmol/L)

去甲腎上腺素 (ng/mL) x 5.91 = 去甲腎上腺素 (nmol/L)

ALPCO產品種類多樣，可測樣品來源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、豬、羊、狗、猴等，涉及神經生物學、骨代謝、心血管疾病和氧化應激、細胞因子與信號轉導、糖尿病和肥胖癥、內分泌學、甲狀腺功能、腸胃病學、免疫學、生殖激素、抗體和抗原、分子診斷等多個研究領域，尤以糖尿病和肥胖癥研究領域見長。

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