SpongeCol，膠原蛋白海綿，柱狀孔結構的制備和使用

SpongeCol?是一種具有交織的柱狀多孔結構的膠原海綿。SpongeCol?包含一種獨特的柱狀多孔網絡，使細胞和營養物質能夠完全流過交織的孔隙，為細胞的附著、生長和遷移提供了增加的表面積。SpongeCol?由高度純化的I型膠原組成，最能夠支持細胞的附著、增殖和功能。這種膠原海綿經輕度交聯，具有增加的機械強度和耐久性，適用于短期和長期組織培養，但在較長時間內仍然可生物降解?？椎闹睆椒秶鷱?00到400微米，平均直徑約為200微米。膠原圓盤直徑約為4毫米，厚度為1.5毫米。海綿圓盤適合放入96孔培養板或衛生盧爾連接器進行流動灌注。每包含二十五個膠原海綿圓盤。該產品經過終端滅菌處理，可立即使用。

艾美捷SpongeCol，膠原蛋白海綿，柱狀孔結構，直徑 4 毫米圓盤（ABM-5135-25EA）特性描述：

孔徑尺寸：約為200微米孔徑，范圍在100至400微米之間。

尺寸：SpongeCol?為圓盤形狀，直徑約為4毫米，厚度為1.5毫米。

pH值：在PBS或組織培養培養基中懸浮時，約為7.0至7.4。

內毒素：用于生產該產品的膠原的內毒素水平為<1.0 EU/ml。

無菌性：SpongeCol?經過輻照處理并通過了無菌性測試。

存儲/穩定性：室溫存放 - 不建議加熱超過40?C。存放在陰涼干燥的地方。該產品的穩定性正在評估中。

本產品僅用于研發目的，不適用于人類或其他用途。請參閱材料安全數據表以獲取有關危害和安全操作規程的信息。

SpongeCol，膠原蛋白海綿，柱狀孔結構，直徑 4 毫米圓盤的制備和使用：

A. 制備和接種：

注意：細胞附著到海綿上通常是組織培養中最關鍵的一步。溫度、pH值、氣體交換和細胞濃度會影響附著的速率和效率。最佳接種速率取決于被培養的細胞類型。

1. 在無菌層流工作臺中從包裝中無菌取出海綿圓盤。

2. 使用無菌器械小心地將海綿放入96孔組織培養板的孔中。在轉移海綿時小心不要損壞海綿。建議使用未經處理的組織培養塑料器皿。

注意：涂有組織的塑料器皿可能需要用瓊脂糖涂層，以防止細胞附著在塑料而不是海綿上。

3. 將細胞懸浮在所需濃度（1x104 –1x105 cells/mL）并將足夠體積的細胞溶液分配到放置在孔中的海綿頂部。

注意：另一種方法是將細胞懸浮在中和的膠原溶液中（如PureCol? I型膠原目錄號5005-100ML或PureCol? EZ凝膠目錄號5074-35ML）。將膠原/細胞溶液分配到放置在孔中的海綿頂部。

4. 轉移到37?C孵育箱中約1 - 2小時，以便細胞初始附著。

注意：如果使用膠原懸浮法，膠原將在37?C聚合并將您的細胞封裝在膠原基質和海綿中。

5. 經過1 - 2小時后，從孵育箱中取出板，并檢查細胞附著情況?？赡苄枰M行額外的測試以優化細胞附著到海綿上所需的時間。檢查細胞的形態。細胞的附著和擴展將決定附著所需的時間。

6. 一旦細胞充分附著到海綿上，增加每個孔中的最終體積，以完全覆蓋并為培養系統提供足夠的培養基。

B. 更換培養基：

1. 在初始接種后的12至24小時更換培養基。更換頻率將由細胞類型、細胞附著效率、pH值（保持在pH 7.0至7.4）、培養中可用的培養基營養物質決定。與2D培養系統相比，可能需要更頻繁地更換培養基。

C. 細胞收獲：

注意：蛋白酶消化是從海綿釋放細胞的標準方法。細胞與膠原海綿的附著強度將因細胞系而異。酶濃度和消化時間將取決于酶的活性和細胞的濃度。膠原酶和/或胰蛋白酶可能是首選方法。

1. 使用EDTA-PBS洗滌海綿可能有助于蛋白酶消化。添加足夠的體積以覆蓋海綿。

2. 從孔中抽吸EDTA-PBS溶液。

3. 向孔中加入足夠的解離溶液，完全覆蓋海綿。

4. 轉移到37?C孵育箱中。定期檢查細胞的脫離情況。

5. 一旦細胞完全脫離，將細胞取出并分配到離心管中。

6. 根據需要離心細胞。