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特色產品當暴露于激發光時,染料的熒光強度會因其光氧化或其他光反應而降低。很少有熒光染料能完全抵抗光漂白。通常,當一個部分在強激發光下反復掃描時,染料可能會在視覺評估或攝影完成之前失去明顯的熒光信號。例如,熒光素(如FITC標記的抗體)的光漂白已成為熒光顯微鏡的一個主要問題。在嚴重的情況下(如藻膽蛋白標記的生物偶聯物),由于極高的光漂白率,甚至無法拍攝高分辨率的熒光圖像。Fluoroquest?防褪色試劑盒旨在降低染料的光漂白速率,為研究人員提供更長的觀察時間。該套件包含所有可以輕松應用于成像實驗的基本組件。它們都是預先混合好的即用型溶液。此套件專為微孔板格式設計,而#20001專為載玻片格式設計。
艾美捷FluoroQuest抗淬滅試劑盒II,適合微孔板成像:
貨號:AAT-20003
單位大?。? 套件
H-短語:H303, H313, H333
危險符號:XN
預期用途:僅限研究使用(RUO)
R-短語:R20, R21, R22
激發:變化
發射:變化
推薦板:黑色壁,透明底
組分:
組分 A:抗褪色試劑 1 瓶
組分 B:測定緩沖液(4 °C) 1 瓶(10 mL)
協議概要:
準備樣品(微孔板孔)
從板中移除液體
每個孔加入100 ?L/孔的抗褪色溶液
在顯微鏡下檢查樣本
庫存溶液的準備:
除非另有說明,所有未使用的庫存溶液應在制備后分成單次使用的小份,并儲存在 -20 °C。避免反復凍融循環。
1. 抗褪色庫存溶液:
將整個瓶的測定緩沖液(組分 B)加入到抗褪色試劑(組分 A)的瓶中。注意:當溶液變棕色時仍然可以使用,但當溶液變黑時請丟棄。
樣品實驗協議:
從您的96孔板中移除多余的液體。
在每個選定的孔中加入100 ?L的抗褪色溶液。
樣品可以在應用抗褪色溶液后立即成像。圖1顯示了一個典型的圖像。
為了使樣品的壽命最優化,請將板儲存在4°C的暗處。

圖:U2OS細胞裝載1?M鈣黃綠素AM 1小時,在96孔Costar黑板上用2%甲醛固定30分鐘。去除所有培養基后,向樣品中加入抗褪色試劑(100?L/孔)。使用奧林巴斯熒光顯微鏡在0和30秒曝光時間比較FITC信號。所有圖像都使用了相同的曝光設置。
FluoroQuest抗淬滅試劑盒II,適合微孔板成像文獻參考:
On the mechanism of Trolox as antiblinking and antibleaching reagent
Authors: Cordes T, Vogelsang J, Tinnefeld P.
Journal: J Am Chem Soc (2009): 5018
Relationship between DAPI-fluorescence fading and nuclear DNA content: An alternative method to DNA quantification
Authors: Gallardo-Escarate C, Alvarez-Borrego J, Von Br and E, Dupre E, Del Rio-Portilla MA.
Journal: Biol Res (2007): 29
Strategies to improve photostabilities in ultrasensitive fluorescence spectroscopy
Authors: Widengren J, Chmyrov A, Eggeling C, Lofdahl PA, Seidel CA.
Journal: J Phys Chem A (2007): 429
The reliability of long-term storage of direct immunofluorescent staining slides at room temperature
Authors: Dikicioglu E, Meteoglu I, Okyay P, Culhaci N, Kacar F.
Journal: J Cutan Pathol (2003): 430
Comparative genomic hybridization technique
Authors: El-Rifai WE, Knuutila S.
Journal: Methods Mol Med (2001): 25

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