羊抗犬IgG2重鏈抗體HRP偶聯物，適用于疫苗效價評估與免疫分型研究

一、產品概述

由艾美捷推出的羊抗犬IgG2重鏈抗體HRP偶聯物（貨號：A40121P）是一款以綿羊為宿主來源、針對狗IgG2重鏈的特異性多克隆抗體。該抗體采用固相吸附及親和層析工藝純化，確保亞類特異性，并與辣根過氧化物酶（HRP）共價偶聯，酶與抗體的摩爾比為4:1?？贵w以完整IgG形式提供，濃度為1 mg/ml，可直接用于酶聯免疫吸附測定、免疫細胞化學、免疫組化及免疫印跡等檢測系統，無需自行標記。

二、靶點信息：狗IgG2重鏈

IgG是犬類血清中主要的免疫球蛋白亞類，其中IgG2是僅次于IgG1的第二大亞類。IgG2的生物學特點包括：

胎盤轉運能力弱：不易通過胎盤屏障，對新生幼犬的被動免疫貢獻較小

Fc受體結合能力強：可有效結合免疫細胞表面的Fc受體，參與抗體依賴的細胞介導的細胞毒性及調理吞噬作用

半衰期差異：相較于IgG3（半衰期較短），IgG2的血清半衰期更長，在免疫應答中發揮持久作用

本抗體特異性識別狗IgG2的重鏈（Heavy Chain），不識別輕鏈或其他非免疫球蛋白血清蛋白，確保在檢測體系中對IgG2亞類的精準識別。

三、產品規格與儲存

參數 | 詳情

靶點 | 狗IgG2重鏈

反應性 | 狗

宿主 | 綿羊

克隆性 | 多克隆

形態 | 全IgG

亞型 | IgG

偶聯物 |HRP（辣根過氧化物酶）

純度 | 抗原親和純化 + 固相吸附去除交叉反應

抗原種屬 | 狗

濃度 |1 mg/ml

緩沖液 | 含0.2% BSA及0.05% ProClean 400的磷酸鹽緩沖液

儲存條件 | 2–8°C

有效期 | 自收貨起1年

濃度測定：偶聯前采用比爾定律測定免疫球蛋白濃度，其中1 mg/ml IgG在280 nm的吸光度為1.4。

防腐劑說明：ProClean 400是一種廣譜防腐劑，可替代疊氮鈉（疊氮鈉會抑制HRP活性），因此本抗體可直接用于HRP檢測系統，無需透析去除防腐劑。

四、生產與純化工藝

1.固相吸附：抗血清經固相吸附處理，去除與免疫球蛋白輕鏈及其他血清蛋白反應的抗體，確保亞類特異性。

2.親和層析：采用偶聯狗IgG2抗原的瓊脂糖珠進行親和純化，僅保留特異性識別IgG2重鏈的抗體。

3.HRP標記：純化后的抗體與HRP共價偶聯，酶/抗體摩爾比為4:1，保證高標記效率和檢測靈敏度。

特異性驗證：經免疫電泳及ELISA驗證，本抗體特異性識別狗IgG2，不識別免疫球蛋白輕鏈及非免疫球蛋白血清蛋白。可能與其他物種的IgG2發生交叉反應（詳見后述）。

五、應用與推薦稀釋度

重要說明：未對列出的所有應用進行實驗室逐一驗證，以下稀釋度范圍基于經驗及文獻推薦，用戶需自行優化。

應用 | 推薦稀釋度 | 備注

ELISA | 1:10,000 – 1:100,000 | 用于檢測板結合的狗IgG2

免疫細胞化學 | 1:200 – 1:2,000 | 適用于細胞涂片或爬片

免疫組化（組織切片） | 1:200 – 1:2,000 | 適用于石蠟或冷凍切片

免疫印跡 | 1:2,000 – 1:20,000 | 用于還原或非還原條件下檢測IgG2重鏈

通用操作建議：

抗體稀釋液：推薦使用含1% BSA或5%脫脂牛奶的PBS或TBS

孵育條件：室溫1–2小時或4°C過夜

檢測：HRP底物推薦TMB（ELISA）、DAB或AEC（IHC/ICC）、ECL（WB）

應用優化建議：

ELISA：

包被：使用純化狗IgG2或含IgG2的血清/腹水，4°C過夜包被

封閉：推薦使用1% BSA或5%脫脂牛奶的PBS，室溫1小時

一抗（本抗體）稀釋：從1:10,000開始，進行倍比稀釋確定最佳工作濃度

顯色：加入TMB底物，顯色10–30分鐘，2M H?SO?終止，讀取OD???

免疫印跡：

樣本制備：推薦使用非還原上樣緩沖液（不含β巰基乙醇或DTT），因還原條件會破壞重鏈與輕鏈間的二硫鍵，導致重鏈遷移至約55 kDa位置；非還原條件下IgG分子量約150 kDa，重鏈仍保留在復合物中

膜封閉：5%脫脂牛奶的TBST，室溫1小時

抗體稀釋：1:2,000–1:20,000，室溫孵育1–2小時

洗滌：TBST洗滌3×5分鐘

檢測：ECL化學發光法

免疫組化/免疫細胞化學：

固定：推薦4%多聚甲醛（室溫10–20分鐘）

通透：0.1–0.25% Triton X100（僅細胞內染色需要；檢測細胞表面IgG則無需通透）

封閉：5%正常兔血清或山羊血清（與二抗宿主匹配）+ 1% BSA，室溫30分鐘

一抗孵育：1:200–1:2,000，4°C過夜或室溫2小時

檢測：DAB或AEC顯色，復染蘇木精（DAB）或甲基綠（AEC）