兔抗BRD2親和純化抗體：低背景IP-WB組合優化方案

一、 產品概述

BRD2（含溴結構域蛋白2）是一種核絲裂原激活激酶，在細胞周期調控基因的轉錄中發揮重要作用。BRD2作為銜接蛋白，將E2F轉錄因子及染色質重塑因子招募至E2F響應元件，從而調控細胞周期依賴性基因的表達。BRD2屬于溴結構域蛋白家族，該家族通過識別乙?；M蛋白參與表觀遺傳調控。

本文介紹的由艾美捷代理Bethyl Laboratories推出的兔抗BRD2親和純化抗體（貨號A302-583A）由美國生產，經抗原親和純化，適用于小鼠及人源樣本的免疫組化（IHC）、免疫沉淀（IP）和免疫印跡（WB）檢測。

二、核心規格參數

參數 | 詳細信息

靶標 | BRD2（含溴結構域蛋白2）

反應性 | 小鼠，人

應用 | IHC, IP, WB

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形式 | 全IgG

免疫原 | 人BRD2蛋白第700–750位氨基酸區間

同型 | IgG

標記 | 非偶聯

純度 | 抗原親和純化

抗原物種 | 人

濃度 | 200 ug/ml

儲存條件 | 2 - 8 °C

保質期 | 收貨后1年

緩沖液 | Tris緩沖鹽水，含0.1% BSA及0.09%疊氮化鈉

三、免疫原與識別表位

本抗體采用表位特異性親和純化工藝制備。將針對BRD2蛋白的特異性表位固定在固相支持物上，從抗血清中親和捕獲并純化特異性抗體。

A302-583A所識別的表位位于人BRD2蛋白第675位至第725位氨基酸之間。編號依據NCBI參考序列NP_005095.1（GeneID 6046）。免疫原設計對應第700–750位氨基酸，實際識別表位落于此區間內（675–725）。該區域位于BRD2蛋白的C末端部分，在溴結構域家族中具有較高的序列特異性。

四、濃度測定方法

免疫球蛋白濃度采用比爾定律測定。標準條件下，1 mg/mL IgG在280 nm波長處的吸光度（A280）為1.4。本抗體濃度為200 ug/ml（即0.2 mg/ml），較常見抗體濃度（1 mg/ml）偏低，使用時需注意相應調整體積。

五、應用與實驗條件

通用說明

所有免疫印跡實驗均采用5%脫脂牛奶-TBST作為封閉液及抗體稀釋液。一抗孵育條件為過夜孵育（推薦4°C）。

推薦稀釋比例與用量

應用 | 推薦稀釋比例/用量 | 特殊說明

免疫組化（IHC） | 1:100 - 1:500 | 推薦使用pH 6.0枸櫞酸鹽緩沖液進行抗原修復（FFPE組織切片）

免疫沉淀（IP） | 6 ug/mg 裂解物 | 按抗體質量計算，體積需相應調整

免疫印跡（WB） | 1:2000 - 1:10000 | 建議從1:2000開始梯度預實驗

六、二抗選擇說明

細胞裂解物免疫印跡：

使用山羊抗兔IgG重鏈和輕鏈抗體（貨號A120-101P）。該二抗可同時識別兔IgG的重鏈和輕鏈。

免疫沉淀產物的免疫印跡：

使用抗兔IgG輕鏈HRP偶聯抗體，并在封閉緩沖液中添加5%正常豬血清（貨號S100-020）。免疫沉淀后樣本經變性處理會釋放抗體的重鏈（約55 kDa）和輕鏈（約25 kDa）。若使用常規二抗，這些抗體片段會產生強烈背景。采用輕鏈特異性二抗可有效降低背景干擾，提高目標蛋白（BRD2分子量約88 kDa）的檢測靈敏度。

七、產品使用與儲存

儲存注意事項

抗體應儲存于2 - 8°C，請勿冷凍。反復凍融會導致抗體聚集和活性下降。本抗體緩沖液中含有0.1% BSA作為穩定蛋白，以及0.09%疊氮化鈉作為防腐劑。

穩定性與保質期

自收貨之日起，在推薦的儲存條件下保質期為1年。因濃度較低（200 ug/ml），建議分裝保存，避免多次開蓋導致的污染和蒸發。

八、濃度特別提醒

與其他常見抗體（如1000 ug/ml）相比，本抗體濃度較低。進行免疫沉淀時，推薦用量為6 ug抗體/mg裂解物，即需加入30 ul抗體（按200 ug/ml計算）至1 mg裂解物中。進行免疫印跡時，以1:2000稀釋度為例，需將1 ul抗體稀釋至2 ml抗體稀釋液中。

九、研究背景補充

BRD2是含溴結構域蛋白家族的成員之一，該家族包括BRD2、BRD3、BRD4和BRDT。BRD2在多種組織中廣泛表達，在胚胎發育、細胞周期進程及腫瘤發生中具有重要功能。研究表明，BRD2基因多態性與青少年肥胖及代謝綜合征相關。此外，BRD2作為轉錄共激活因子，參與NF-κB介導的炎癥反應及MHC II類基因的表達調控。近年來，溴結構域抑制劑（如JQ1）作為抗腫瘤藥物進入臨床試驗，本抗體可用于BRD2靶向藥物的藥效評估及機制研究。

別名：

BRD2內含子轉錄本1（BRD2-IT1）、雌性無菌同源相關基因1（FSH）、FSRG1、NAT、O27.1.1、Really interesting new gene 3蛋白（RING3）、RNF3