兔抗TopBP1親和純化抗體：DNA損傷與復制研究專用

一、產品概述

TopBP1（DNA拓撲異構酶II結合蛋白1）是一種參與DNA拓撲狀態調控的關鍵蛋白。該蛋白通過其C末端區域與拓撲異構酶IIβ（Topo IIβ）相互作用，在DNA復制、DNA損傷檢查點激活及細胞存活等多個細胞生長調控環節中發揮重要作用。TopBP1含有多個BRCA1 C末端（BRCT）結構域，通過這些結構域與多種蛋白相互作用。研究顯示，TopBP1可通過不依賴于Rb的機制與E2F1轉錄因子結合并抑制其活性，該過程涉及募集SWI/SNF染色質重塑復合物中的Brg1和Brm蛋白。

本文介紹的由艾美捷代理Bethyl Laboratories推出的兔抗TopBP1親和純化抗體（貨號A300-111A）由美國生產，經抗原親和純化，適用于小鼠及人源樣本的免疫沉淀（IP）和免疫印跡（WB）檢測。

二、核心規格參數

參數 | 詳細信息

靶標 | TopBP1（DNA拓撲異構酶II結合蛋白1）

反應性 | 小鼠，人

應用 | IP, WB

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形式 | 全IgG

免疫原 | 人TopBP1蛋白第1472位氨基酸至C末端區間

同型 | IgG

標記 | 非偶聯

純度 | 抗原親和純化

抗原物種 | 人

濃度 | 1000 ug/ml

儲存條件 | 2 - 8 °C

保質期 | 收貨后1年

緩沖液 | Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液，pH 7-8，含0.09%疊氮化鈉

三、免疫原與識別表位

本抗體采用表位特異性親和純化工藝制備。將針對TopBP1蛋白的特異性表位固定在固相支持物上，從抗血清中親和捕獲并純化特異性抗體。

A300-111A所識別的表位位于人TopBP1蛋白第1400位殘基至C末端（第1435位殘基）之間。編號依據NCBI參考序列NP_008958.1（GeneID 11073）。該區域位于TopBP1的C末端，鄰近其與拓撲異構酶IIβ相互作用的結構域。

四、濃度測定方法

免疫球蛋白濃度采用比爾定律測定。標準條件下，1 mg/mL IgG在280 nm波長處的吸光度（A280）為1.4。本抗體濃度為1000 ug/ml（即1 mg/ml），可直接按體積量取使用。

五、應用與實驗條件

通用說明

所有免疫印跡實驗均采用5%脫脂牛奶-TBST作為封閉液及抗體稀釋液。一抗孵育條件為過夜孵育（推薦4°C）。

推薦稀釋比例與用量

應用 | 推薦稀釋比例/用量

免疫沉淀（IP） | 6 ug/mg 裂解物

免疫印跡（WB） | 1:2000 - 1:10000

二抗選擇說明

細胞裂解物免疫印跡：

使用山羊抗兔IgG重鏈和輕鏈抗體（貨號A120-101P）。該二抗可同時識別兔IgG的重鏈和輕鏈，適用于檢測總IgG信號。

免疫沉淀產物的免疫印跡：

使用抗兔IgG輕鏈HRP偶聯抗體，并在封閉緩沖液中添加5%正常豬血清（貨號S100-020）。這一組合的設計目的是：免疫沉淀后，樣本經變性處理會釋放抗體的重鏈（約55 kDa）和輕鏈（約25 kDa）。若使用識別重鏈和輕鏈的常規二抗，這些抗體片段會產生強烈的背景信號，可能掩蓋目標蛋白（TopBP1分子量約170 kDa）的信號。采用輕鏈特異性二抗，只有輕鏈被檢測，重鏈信號不被放大，從而顯著降低背景干擾。添加正常豬血清可進一步封閉非特異性結合。

六、產品使用與儲存

儲存注意事項

抗體應儲存于2 - 8°C，請勿冷凍。反復凍融會導致抗體聚集和活性下降。緩沖液中含有0.09%疊氮化鈉作為防腐劑，可有效抑制微生物污染。

穩定性與保質期

自收貨之日起，在推薦的儲存條件下保質期為1年。建議分裝為單次使用量儲存于2-8°C，避免反復開蓋引入污染。

七、應用要點總結

1. 分子量提示：TopBP1的預測分子量約為170 kDa。在免疫印跡檢測中，建議使用4-12% Bis-Tris梯度凝膠或6-8% SDS-PAGE凝膠以獲得良好的分辨率。高分子量蛋白的轉膜條件需優化（建議使用PVDF膜，濕轉條件：100V，90-120分鐘）。

2. 免疫沉淀用量：每mg細胞裂解蛋白使用6 ug抗體。若TopBP1表達水平較低（如在某些非轉化細胞系中），可適當增加抗體用量至8-10 ug/mg裂解物。建議同時使用同型對照兔IgG作為陰性對照。

3. 細胞裂解液選擇：TopBP1主要定位于細胞核，且與染色質緊密結合。推薦使用含高鹽（如300-400 mM NaCl）和核酸酶的裂解緩沖液（如RIPA緩沖液或改良的ChIP裂解液），以充分釋放染色質結合的TopBP1。

4. 跨物種驗證：經驗證可識別小鼠和人源TopBP1蛋白。對于大鼠等其他物種，建議通過序列比對評估保守性后驗證。

5. 功能研究價值：該抗體識別人TopBP1的C末端區域（1400-1435位氨基酸）。TopBP1通過其C末端與Topo IIβ相互作用，并通過BRCT結構域參與DNA損傷檢查點激活（特別是ATR-Chk1通路）。本抗體適用于研究TopBP1在DNA復制應激響應、檢查點信號轉導及E2F1轉錄調控中的分子機制。