兔抗JMJD2B抗體，親和純化，助力低豐度組蛋白去甲基化酶檢測

本文旨在對艾美捷Bethyl Laboratories推出的JMJD2B靶點特異性抗體（貨號A301-478A）的核心技術參數、應用方法及產品特性進行系統性梳理，為相關實驗設計提供直接參考。

一、產品基本特性

該抗體為兔源多克隆抗體，以全IgG形式提供，未經偶聯標記。其目標靶點為JMJD2B（又稱KDM4B、賴氨酸特異性去甲基化酶4B），在人和小鼠樣本中具有驗證活性?？贵w經抗原親和純化處理，純度可靠，濃度標定為1000 ?g/ml。

免疫原設計基于人JMJD2B蛋白C末端附近區域（介于第1046位氨基酸與C末端之間），具體識別表位定位在第1056至1096位氨基酸殘基區間（參考序列NP_055830.1，基因ID 23030）。該區域的選擇確保了抗體對天然構象蛋白的有效識別。

二、儲存與緩沖體系

儲存條件：2 – 8°C冷藏，切勿冷凍。  

有效期：收貨之日起1年。  

緩沖液組成：Tris-枸櫞酸/磷酸緩沖液，pH 7–8，含0.09%疊氮鈉作為防腐劑。  

濃度測定方法：基于比爾定律（1 mg/ml IgG在280 nm處吸光度為1.4）計算得出。

使用前需注意疊氮鈉對HRP標記二抗的抑制效應，如后續涉及ELISA或WB化學發光檢測，建議通過充分洗滌或使用無疊氮鈉的替代緩沖體系。

三、推薦應用流程

1. 免疫沉淀

用量：每毫克細胞裂解物使用6 ?g抗體。  

操作中需保持樣本低溫，避免反復凍融?？贵w與裂解液共孵育后可借助Protein A/G磁珠或瓊脂糖珠捕獲免疫復合物。

2. 蛋白質印跡

工作稀釋度：1:2000 – 1:10000。  

封閉與稀釋液：含5%脫脂奶粉的TBST。  

一抗孵育：建議4°C過夜，可增強低豐度靶蛋白檢出能力。  

檢測體系區別：

細胞裂解物直接WB：推薦使用山羊抗兔IgG（重鏈+輕鏈）HRP二抗（如A120-101P）。  

免疫沉淀后WB：為規避免疫球蛋白重鏈（約55 kDa）信號干擾，需使用抗兔IgG輕鏈HRP偶聯二抗，同時在封閉液中加入5%正常豬血清（貨號S100-020）以降低背景。

四、靶點生物學背景

JMJD2B是含Jumonji結構域組蛋白去甲基化酶家族成員，主要催化H3K9me3（組蛋白H3第9位賴氨酸三甲基化）的去甲基化反應。通過調控染色質狀態，JMJD2B參與轉錄激活與抑制的平衡，在細胞周期、激素信號通路及腫瘤發生中具有重要作用。

五、別名與同源性

該抗體識別的抗原在不同數據庫中可能存在以下別稱：  

jmjC結構域組蛋白去甲基化蛋白3B  

JMJD2B  

Jumonji結構域包含蛋白2B  

含Tudor結構域蛋白14B（TDRD14B）  

跨物種反應性已驗證為小鼠和人，其他物種需通過序列比對（表位區1056–1096）預測交叉性。

六、注意事項與質量控制

生產國家：美國  

純化工藝：采用固相載體上固定化的JMJD2B特異性表位進行親和純化，確保非特異性IgG去除徹底。  

每次實驗建議設置陽性對照（如已知表達JMJD2B的細胞裂解物）與陰性對照（如免疫前IgG或僅二抗處理）。  

經測試，該抗體適用于非還原條件樣本制備，但若靶蛋白分子量接近50 kDa（輕鏈干擾區），IP-WB檢測時必須使用輕鏈特異性二抗。