兔抗細胞骨架肌動蛋白抗體親和純化，加載對照與細胞定位雙功能

產品概述

細胞骨架肌動蛋白（Cytoskeletal Actin）是真核細胞中含量最豐富、進化上高度保守的蛋白家族成員，在維持細胞形態、參與細胞運動和胞質分裂等過程中發揮核心作用。本文介紹的由艾美捷Bethyl Laboratories推出的兔抗細胞骨架肌動蛋白抗體親和純化（貨號：A300-485A）是一款兔源多克隆抗體，特異性識別細胞骨架肌動蛋白的N端區域，適用于免疫印跡（WB）和免疫組織化學（IHC）應用，反應種屬包括小鼠和人。該抗體主要針對γ-肌動蛋白（Gamma-actin）設計，同時初步驗證表明其也可識別β-肌動蛋白（Beta-actin），因此可作為多種細胞類型的內參檢測工具。

基本規格

抗體類型：兔多克隆IgG，完整IgG形式，未偶聯。

免疫原：對應人γ-肌動蛋白（Actin, cytoplasmic 2）N端第1至50位氨基酸殘基區間，參考Swiss-Prot條目P63261（GeneID 71）。由于γ-肌動蛋白的N端與β-肌動蛋白高度保守，該抗體也可能識別β-肌動蛋白（GeneID 60）。

純化方式：抗原親和純化——將特異性表位固定于固相載體，富集高特異性抗體。

濃度：1000 ?g/ml（測定方法：比爾定律，1 mg/mL IgG在A280nm處吸光度為1.4）。

緩沖體系：Tris-檸檬酸/磷酸緩沖液，pH 7-8，含0.09%疊氮化鈉作為防腐劑。

儲存與穩定性：2-8°C保存，自收貨之日起穩定期1年。

反應種屬與特異性

已驗證反應種屬：小鼠（Mouse）和人（Human）。抗體識別表位位于γ-肌動蛋白的N端區域（第1-50位）。由于β-肌動蛋白與γ-肌動蛋白在N端具有高度同源性，產品說明指出該抗體很可能也識別β-肌動蛋白。用戶在使用時應注意，WB檢測通常會顯示出一條約42 kDa的單一清晰條帶，對應兩種亞型的總信號。如需區分亞型，建議結合亞型特異性抗體或質譜分析。

推薦應用與實驗條件

1. 免疫印跡（Western Blot，WB）

推薦稀釋比：1:2,000 至 1:10,000

通用WB操作要點：

封閉液和抗體稀釋液：5%脫脂牛奶-TBST

一抗孵育：過夜（O/N）

二抗選擇：使用山羊抗兔IgG（重鏈+輕鏈）抗體（如A120-101P）

預期條帶：約42 kDa。由于肌動蛋白在細胞中表達豐度極高，建議適當控制上樣量（5-15 ?g總蛋白/泳道）以避免信號過飽和。

應用場景：

作為Western blot的上樣對照（loading control），校正蛋白定量和轉膜效率。

檢測總細胞骨架肌動蛋白表達水平的變化。

2. 免疫組織化學（IHC）

推薦稀釋比：1:2,000 至 1:10,000

抗原修復：

通常可能不需要抗原修復：對于大多數組織切片，可直接進行染色。

增強染色：在某些情況下，使用檸檬酸緩沖液（pH 6.0）進行熱誘導抗原修復可提高染色強度和質量，尤其適用于福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）組織切片。

適用樣本：小鼠或人源組織冰凍切片或石蠟切片

預期定位：細胞質，特別是細胞皮層和應力纖維。肌動蛋白在細胞中普遍表達，IHC染色應呈現均勻的胞質分布。

細胞骨架肌動蛋白的生物學功能

肌動蛋白是真核細胞骨架的核心組分，由多個高度保守的基因編碼。哺乳動物中主要表達六種肌動蛋白亞型，其中細胞質中主要表達β-肌動蛋白和γ-肌動蛋白。

別名：Gamma-actin、DFNA20、DFNA26（耳聾相關）、HEL-176等

主要功能：

維持細胞結構：肌動蛋白聚合形成微絲，構成細胞骨架網絡，為細胞提供機械支持和形狀。

參與細胞運動：通過動態的聚合和解聚，介導細胞遷移、胞質分裂、吞噬作用和細胞突起形成。

肌肉收縮與非肌肉運動：在非肌肉細胞中，肌動蛋白與肌球蛋白相互作用產生收縮力。

內參應用：由于其在所有真核細胞中穩定高表達，肌動蛋白（特別是β-actin和γ-actin）是Western blot中最常用的上樣對照之一。

β-肌動蛋白與γ-肌動蛋白的差異：盡管兩者高度同源（氨基酸序列相似性>98%），但它們在細胞內的分布和功能存在細微差異。γ-肌動蛋白在細胞邊緣和應力纖維中富集程度更高，而β-肌動蛋白更集中于細胞前緣。本抗體同時識別兩種亞型，可提供總細胞骨架肌動蛋白的信號。

技術建議與注意事項

稀釋優化

WB推薦的1:2,000-1:10,000稀釋范圍較寬。由于肌動蛋白豐度極高，建議從1:10,000起始，根據信號強度反向調整。過高的抗體濃度（如1:2,000）可能導致非特異性條帶或背景過深。對于IHC，同樣建議從1:5,000開始，再根據染色效果優化。

作為上樣對照的使用建議

上樣量控制：肌動蛋白信號容易飽和，建議對樣品進行梯度上樣（如5、10、15、20 ?g），使用1:10,000稀釋的抗體預實驗，確定線性檢測范圍。

信號強度對比：理想的上樣對照應在不同樣本間信號強度一致。若發現信號不均，應先確認蛋白定量是否準確，轉膜是否均勻。

剝離與重探：如果膜上已用其他抗體檢測過高豐度蛋白，剝離后重探肌動蛋白可能信號減弱。建議單獨使用一張膜或先檢測低豐度靶標，最后再檢測肌動蛋白。