抗PBEF（NAMPT/Visfatin）多克隆抗體，超寬動態稀釋范圍，高信噪比，低背景

一、產品概述

由艾美捷代理Bethyl Laboratories推出的本產品為兔源抗人/小鼠PBEF（pre-B-cell colony enhancing factor 1，又稱NAMPT或Visfatin）蛋白特異性多克隆抗體（貨號：A300-372A）。PBEF是一種多功能蛋白，既可作為細胞因子（visfatin）分泌于細胞外，調節胰島素信號和血糖代謝，又作為胞內酶——煙酰胺磷酸核糖轉移酶（NAMPT），催化NAD?生物合成的限速步驟。PBEF在脂肪組織高度表達，其水平與肥胖、2型糖尿病正相關，同時也參與B細胞分化、炎癥應答及細胞存活等過程。本抗體經抗原親和純化，識別PBEF蛋白第400–450位氨基酸區域，適用于免疫組化（IHC）、免疫沉淀（IP）及免疫印跡（WB）等多種應用，是代謝、炎癥及腫瘤研究領域的重要工具。

二、詳細規格

參數 | 規格

靶標 | PBEF（NAMPT/Visfatin）

反應種屬 | 小鼠、人

應用 | IHC, IP, WB

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形式 | 全IgG

免疫原 | 人PBEF蛋白第400–450位氨基酸之間的區域（Swiss-Prot P43490）

抗體類型 | IgG

偶聯物 | 未偶聯

純度 | 抗原親和純化

抗原種屬 | 人

濃度 | 1000 ?g/ml（1 mg/ml）

儲存溫度 | 2 - 8 °C

有效期 | 自收貨之日起1年

緩沖液 | Tris-檸檬酸-磷酸緩沖液，pH 7–8，含0.09% 疊氮鈉

三、產品制備與質量控制

本抗體采用固相載體固定的PBEF特異性表位進行親和純化。免疫原對應人PBEF（GeneID 10135，Swiss-Prot P43490）第400至450位氨基酸區域，該序列在人和小鼠之間高度保守?？贵w經抗原親和層析后，免疫球蛋白濃度通過比爾定律測定（1 mg/ml IgG在280 nm處吸光度為1.4）。

每批次質控標準：

Western blot：在人HEK293、HeLa或小鼠3T3-L1脂肪細胞裂解液中檢測到約55–60 kDa的特異性條帶（PBEF分子量約55 kDa）；使用重組PBEF蛋白作為陽性對照。

免疫沉淀：6 ?g/mg裂解物可從細胞裂解液中有效富集內源性PBEF，洗脫產物經WB檢測信號明確。

免疫組化：對小鼠脂肪組織或人胎盤FFPE切片進行染色，應呈現胞漿及核周陽性信號。

四、推薦應用與實驗條件

所有Western blot實驗建議使用5%脫脂牛奶-TBST作為封閉液和抗體稀釋液，一抗孵育條件為4°C過夜。以下為各應用的推薦起始條件：

應用 | 推薦稀釋度/用量 | 備注

Western Blot (WB) | 1:10,000 – 1:25,000 | 檢測細胞裂解液時，二抗推薦山羊抗兔IgG（H+L）（貨號A120-101P）；檢測免疫沉淀物時，二抗建議使用抗兔IgG輕鏈HRP偶聯抗體，并在封閉液中加入5%正常豬血清（貨號S100-020）以消除重鏈干擾。

Immunoprecipitation (IP) | 6 ?g/mg 裂解物 | 每毫克總蛋白使用6 ?l抗體（1 mg/ml濃度對應6 ?g）。推薦與Protein A/G磁珠或瓊脂糖珠孵育2–4小時或過夜。

Immunohistochemistry (IHC) | 1:2,000 – 1:10,000 | 對福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）組織切片，推薦使用pH 6.0枸櫞酸鹽緩沖液進行熱誘導抗原修復（高壓或微波）。建議進行梯度滴定以確定最佳稀釋度。

五、儲存與穩定性

儲存條件：2 - 8°C，嚴禁冷凍。冷凍會導致抗體聚集及活性喪失。

有效期：自收貨之日起1年，在2-8°C未稀釋、避光保存。

運輸條件：冰袋冷藏運輸，收貨后請立即存放于2-8°C。

防腐劑：緩沖液含0.09%疊氮鈉，可抑制微生物生長。注意：疊氮鈉會抑制HRP活性，若用于非HRP檢測系統（如熒光）則無影響；若需去除，可通過透析或脫鹽柱處理。

六、注意事項

1. 僅限科研使用：不得用于臨床診斷或治療。

2. 特異性驗證：PBEF存在多種翻譯后修飾及剪切異構體，建議在實驗中使用已知陽性對照（如3T3-L1脂肪細胞裂解液或重組PBEF蛋白）驗證抗體識別條帶的正確分子量（~55 kDa）。

3. 樣品制備：檢測分泌型PBEF時，需收集細胞培養上清并濃縮；檢測胞內PBEF時，推薦使用RIPA裂解液（含蛋白酶抑制劑）。

4. IHC抗原修復：對FFPE切片，必須進行熱誘導抗原修復（枸櫞酸鹽pH 6.0），否則信號減弱。建議同時進行不含一抗的陰性對照。

5. 安全操作：疊氮鈉有毒，操作時請佩戴手套。廢液按有害物處理。

6. 應用范圍：本抗體未經驗證用于ELISA或流式細胞術，若需使用請自行優化。

七、相關產品推薦

產品類型 | 貨號（示例） | 描述

二抗（WB） | A120-101P | 山羊抗兔IgG（H+L）HRP偶聯物

二抗（IP-WB） | 輕鏈特異性 | 抗兔IgG輕鏈HRP偶聯抗體，需配合正常豬血清（S100-020）

陽性對照裂解物 | 可咨詢 | 3T3-L1脂肪細胞裂解物或重組PBEF蛋白

阻斷肽 | A300-372P | 對應免疫原的競爭肽，用于抗體特異性驗證