兔抗生物素抗體親和純化，高特異性結合，低背景無交叉干擾

一、產品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的本品（貨號：A150-109A）為針對生物素（Biotin，維生素B7）的兔源多克隆抗體（Whole IgG格式），經抗原親和純化，適用于酶聯免疫吸附測定（ELISA）、免疫細胞化學（ICC）、免疫組化（IHC）及Western Blot（WB）檢測。生物素是哺乳動物代謝中重要的輔酶，在分子生物學領域更被廣泛用作標記分子，通過其與鏈霉親和素的強親和力實現信號放大或目標捕獲。本抗體可特異性識別生物素標記的蛋白或核酸，是檢測生物素化探針、評估標記效率及定位生物素化分子的理想工具。

二、關鍵規格參數

參數 | 詳細信息

靶標 | 生物素（Biotin，維生素B7）

反應性 | 不適用（針對小分子半抗原）

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

格式 | Whole IgG

亞型 | IgG

純化方式 | 抗原親和純化（生物素-瓊脂糖凝膠）

濃度 | 1 mg/ml |

存儲條件 | 2 - 8 °C

保質期 | 收貨后2年

緩沖液 | 磷酸鹽緩沖液（PBS），含0.09%疊氮化鈉

三、免疫原與特異性

3.1 生產流程

本抗體通過使用生物素偶聯的瓊脂糖凝膠進行親和層析分離純化。免疫球蛋白濃度采用比爾定律測定（1 mg/mL IgG在A280處吸光度為1.4）。

3.2 特異性驗證

經免疫電泳和ELISA驗證，本抗體與以下抗原特異性反應：

KLH-生物素（鑰孔血藍蛋白-生物素偶聯物）

BSA-生物素（牛血清白蛋白-生物素偶聯物）

無交叉反應：與游離KLH或游離BSA均無反應。

該特異性驗證表明，抗體識別的是生物素分子本身，而非載體蛋白。因此，本抗體可廣泛用于檢測任何生物素化分子（蛋白、核酸、多糖等），無需考慮載體蛋白類型。

3.3 適用性說明

由于生物素為小分子半抗原，通常需要偶聯至載體蛋白才能有效免疫動物。本抗體經親和純化后，已去除抗載體蛋白的抗體成分，確保對生物素表位的高特異性識別。

四、應用方法與推薦條件

重要提示：并非所有列出的應用均已由我們的實驗室進行過具體驗證。以下提供的稀釋范圍為基于文獻及客戶反饋的參考起始條件，建議用戶在初次使用時進行梯度優化。

4.1 酶聯免疫吸附測定（ELISA）

參數 | 推薦條件

檢測稀釋比 | 1:1000 - 1:30,000

包板稀釋比 | 1:100 - 1:500（用于包被生物素化抗原）

操作提示：

作為檢測抗體時，建議從1:5000起始進行倍比稀釋，選擇信噪比最高的稀釋度。

用于包被ELISA板時（如固定生物素化BSA），1:100-1:500的稀釋度可提供足夠的包被密度。

推薦使用含0.05% Tween-20的PBS作為洗滌緩沖液，含1% BSA的PBS作為封閉液和抗體稀釋液。

4.2 免疫細胞化學（ICC）

參數 | 推薦條件

稀釋比例 | 1:200 - 1:2000

操作提示：

用于檢測細胞表面或胞內生物素化蛋白。若檢測胞內靶標，需進行固定和透化處理（推薦4%甲醛固定，0.1% Triton X-100透化）。

建議從1:500起始，根據信號強度調整稀釋度。

應設置未生物素化樣本作為陰性對照，以排除內源性生物素干擾（某些細胞類型含內源性生物素，可預先用親和素封閉試劑處理）。

4.3 免疫組化（IHC）

參數 | 推薦條件

稀釋比例 | 1:200 - 1:2000

樣本類型 | 福爾馬林固定、石蠟包埋（FFPE）組織切片或冰凍切片

操作提示：

對于FFPE切片，推薦使用檸檬酸鹽緩沖液（pH 6.0）或EDTA緩沖液（pH 8.0）進行熱誘導抗原修復。

內源性生物素在某些組織（如肝臟、腎臟）中豐度較高，建議使用親和素/生物素封閉試劑盒預處理切片，以消除非特異性染色。

推薦起始稀釋度為1:500，根據背景和信號強度向上或向下調整。

4.4 Western Blot（WB）

參數 | 推薦條件

稀釋比例 | 1:1000 - 1:30,000

封閉/稀釋液 | 5% 脫脂牛奶-TBST 或 3% BSA-TBST

操作提示：

本抗體可用于檢測轉印膜上生物素化蛋白（如生物素標記的抗體、生物素化細胞裂解液中的蛋白）。

推薦起始稀釋度為1:5000，寬范圍（1:1000-1:30,000）允許根據不同樣本豐度靈活調整。

必須設置未生物素化的同批次蛋白樣本作為陰性對照，以評估背景。

若檢測內源性生物素化羧化酶（如乙酰輔酶A羧化酶，分子量約265 kDa），信號可能較強，建議使用更高稀釋度（如1:20,000-1:30,000）。

二抗選擇：使用HRP或熒光標記的抗兔二抗進行檢測。二抗稀釋度參照供應商推薦。

五、生物學功能

代謝輔酶：生物素是五種羧化酶（乙酰輔酶A羧化酶、丙酰輔酶A羧化酶、丙酮酸羧化酶、甲基巴豆酰輔酶A羧化酶、甲基丙二酰輔酶A羧化酶）的必需輔因子，參與脂肪酸合成、糖異生和氨基酸代謝。

基因表達調控：通過組蛋白生物素化修飾參與染色質重塑和基因轉錄調控。

分子生物學應用：

標記與捕獲：生物素可與鏈霉親和素/親和素形成極高親和力（Kd ~10??? M）的非共價結合，是分子生物學中最常用的親和標記系統。

生物素化探針：抗體、核酸、小分子均可通過化學偶聯引入生物素標簽，用于ELISA、Western Blot、免疫組化、Pull-down、流式細胞術等檢測。

信號放大：基于生物素-鏈霉親和素系統的檢測靈敏度遠高于直接標記法。

六、存儲與穩定性

存儲溫度：2 - 8°C，請勿冷凍。冷凍可能導致抗體聚集或活性下降。

保質期：收貨后2年內保持穩定，優于多數抗體的1年保質期。

防腐劑：含0.09%疊氮化鈉，可抑制微生物污染。若下游應用涉及HRP檢測，需注意疊氮化鈉會抑制過氧化物酶活性，可通過透析或脫鹽柱去除。

緩沖液體系：磷酸鹽緩沖液（PBS，pH 7.2-7.4），兼容絕大多數免疫檢測體系。避免反復開蓋，建議分裝后長期保存（2-8°C）。