HSA：FcRn中和抗體篩選化學發光檢測試劑盒：FcRn-lgG半衰期延長工程化抗體篩選

新生兒Fc受體（FcRn）是一種由FCGRT基因編碼的Fcγ受體與β2-微球蛋白（B2M）組成的異源二聚體蛋白。FcRn在超過25種組織中表達，脾臟和腸道中水平最高，其核心功能是結合并保護單體免疫球蛋白G（IgG），通過回收IgG并將其再循環至血液循環中，從而顯著延長IgG的半衰期。此外，FcRn還參與血清白蛋白（HSA）的穩態調節。在胎盤組織中，FcRn介導母體IgG向胎兒的主動轉運，為新生兒提供被動免疫。

FcRn的這一獨特生物學功能使其成為藥物開發的雙重靶點：一方面，通過工程化改造治療性抗體的Fc區以增強其對FcRn的親和力，可延長抗體半衰期，提高藥效——例如用于治療COVID-19的抗體雞尾酒Evusheld以及TNF-α/Fc融合蛋白Enbrel，均利用了FcRn介導的再循環機制。另一方面，在自身免疫性疾病中，致病性自身抗體是疾病進展的關鍵驅動因素。阻斷FcRn與IgG的相互作用，可加速包括致病性自身抗體在內的總IgG清除?；谶@一策略，首個靶向FcRn的藥物efgartigimod已獲FDA批準用于治療重癥肌無力，為這一治療路徑提供了概念驗證。

為滿足研究人員在FcRn靶向藥物篩選中的需求，由艾美捷代理的BPS Bioscience 公司推出的 HSA:FcRn 中和抗體篩選化學發光檢測試劑盒（貨號：82151）提供了一套完整、靈敏、高通量兼容的解決方案。該試劑盒專門用于篩選和表征能夠阻斷人血清白蛋白（HSA）與人FcRn相互作用的中和抗體或阻斷劑，適用于自身免疫病治療藥物及半衰期延長型抗體藥物的早期發現。

圖1：HSA:FcRn中和抗體篩選化學發光檢測試劑盒工作原理示意圖。

一個96孔板或384孔板被FcRn蛋白包被。封閉后，用封閉劑或中和抗體對板進行預孵育。隨后與生物素-HSA孵育，用鏈霉親和素-HRP處理板，然后加入ELISA ECL底物以產生化學發光，該化學發光可使用化學發光儀進行測量。化學發光信號與HSA與FcRn的結合成比例。

一、試劑盒核心組分與設計優勢

1. 即用型完整組分，操作簡便

試劑盒提供所有必需成分：

生物素化人血清白蛋白（Biotinylated HSA）：作為配體。

重組人FcRn蛋白（FCGRT/B2M）：包含FCGRT的24-297位氨基酸及B2M的21-119位氨基酸，保留天然結合活性。

鏈霉親和素-辣根過氧化物酶（Streptavidin-HRP）：用于化學發光檢測。

檢測緩沖液及洗滌緩沖液：優化反應條件，降低背景。

用戶無需額外準備蛋白或酶，即可直接開展實驗。

2. 化學發光檢測，高靈敏度與寬動態范圍

本試劑盒采用化學發光ELISA原理：將FcRn蛋白包被于微孔板，加入生物素化HSA和待測中和抗體（或阻斷劑）。如果抗體能阻斷HSA與FcRn的結合，則后續結合的Streptavidin-HRP減少，化學發光信號降低。發光強度與HSA-FcRn結合程度成正比，與中和抗體的活性成反比?；瘜W發光法具有背景低、信噪比高、不受化合物自發熒光干擾等優點，特別適用于復雜樣本的篩選。

3. 96孔/384孔雙規格，兼容高通量篩選

試劑盒提供96孔（100次反應）和384孔（400次反應）兩種規格，可與自動化移液工作站無縫對接，實現高通量篩選（HTS）。用戶可在單次實驗中完成數百至數千個候選抗體或化合物的初篩，快速識別能夠阻斷HSA-FcRn相互作用的中和抗體。

4. 內置陽性對照（可選）與嚴格質控

雖然產品描述中未明確列出陽性對照抗體，但試劑盒設計允許用戶使用已知的FcRn阻斷劑（如efgartigimod或工程化Fc片段）作為陽性對照，以驗證實驗體系的有效性。BPS Bioscience可提供推薦對照品。

二、應用場景與科研價值

1. 自身免疫病治療性中和抗體的篩選

FcRn抑制劑通過加速致病性IgG的清除，已在重癥肌無力、尋常型天皰瘡、免疫性血小板減少癥等自身免疫病中顯示出臨床潛力。利用該試劑盒，研究人員可以：

篩選能夠阻斷HSA-FcRn相互作用的單克隆抗體、納米抗體或小分子化合物。

對陽性克隆進行親和力成熟和表位競爭分析。

測定候選藥物的IC50，比較不同阻斷劑的效力。

2. 延長治療性抗體半衰期的工程化篩選

通過Fc區突變（如M252Y/S254T/T256E，即YTE突變）增強抗體對FcRn的親和力，可顯著延長抗體半衰期，減少給藥頻率。該試劑盒可用于：

評估工程化Fc變體與FcRn的結合能力（使用生物素化HSA作為競爭配體）。

篩選具有高親和力但不阻斷HSA結合的Fc變體（因為HSA與IgG結合FcRn的位點部分重疊但不同，需要根據具體設計選擇）。

優化雙特異性抗體或Fc融合蛋白的Fc區序列。

3. 藥物聯合應用的機制研究

FcRn不僅結合IgG，也結合HSA。一些疾病狀態下（如腎病綜合征）白蛋白水平異常，可能影響FcRn的藥物轉運功能。利用該試劑盒，可以研究：

病理濃度的HSA對FcRn-IgG結合的競爭影響。

同時靶向IgG和HSA結合位點的雙功能阻斷劑的協同效應。

三、技術參數與操作要點

規格與儲存

檢測格式：化學發光（96孔或384孔板）。

物種：人源。

靶點：HSA 與 FcRn (FCGRT/B2M)。

運輸溫度：-80°C（干冰）。

穩定性：按照指示儲存（各組分保存條件詳見說明書），試劑盒在收貨后6個月內保持最佳性能。

監管狀態：僅限研究使用（Research Use Only），不可用于臨床診斷。

操作流程概述（典型步驟）

1. 包被：將FcRn蛋白稀釋于包被緩沖液，加入微孔板，4°C過夜或37°C孵育2小時。

2. 封閉：加入封閉緩沖液，室溫孵育1小時。

3. 加樣：同時加入生物素化HSA和梯度稀釋的待測中和抗體（或阻斷劑），室溫孵育1-2小時。

4. 檢測：加入Streptavidin-HRP，室溫孵育30分鐘；洗滌后加入化學發光底物，立即讀取發光值。

5. 數據分析：計算抑制率，擬合IC50曲線。

注意事項

避免反復凍融：FcRn蛋白和生物素化HSA應分裝保存于-80°C，避免多次凍融導致活性下降。

DMSO兼容性：如果篩選小分子化合物，確保終濃度DMSO不超過1%（通?？杉嫒荩?。

陽性對照：強烈建議使用已知阻斷劑（如efgartigimod或抗FcRn抗體）作為陽性對照，以監控實驗質量。

非特異性結合：設置無FcRn包被的對照孔，評估待測抗體的非特異性結合。

四、文獻參考

Chaudhury C., et al., 2006 Biochemistry.  45 (15): 4983-90.

Dall'Acqua W.F., et al., 2002 J Immunol. 169(9): 5171-80.

Sand K.M.K., et al., 2014 J Biol Chem. 289 (24):17228-39.