LysA Universal PARylation檢測試劑盒：細胞總PARylation精準定量檢測方案

在細胞應激響應與DNA損傷修復研究中，PARylation（多聚ADP-核糖化）作為一種關鍵的可逆翻譯后修飾，正日益受到廣泛關注。由PARP家族（PAR聚合酶）和PARG（PAR糖水解酶）共同調控的PAR穩態，在炎癥、缺血、卒中及癌癥等多種疾病進程中發揮著重要作用。針對PARP的抑制劑已在腫瘤治療中獲得成功，而PARG的過度表達與乳腺癌的發生發展密切相關。因此，準確、便捷地檢測細胞內的總PARylation水平，對于基礎研究及藥物開發具有重要意義。由艾美捷代理BPS Bioscience研發的LysA Universal PARylation檢測試劑盒（貨號：82123）正是為此設計的一套完整的酶聯免疫吸附測定（ELISA）解決方案。

圖1：LysA通用PAR化檢測工作流程圖。

使用抗標準桿數（PAR）抗體包被96孔板。將細胞裂解液加入包被的孔中，使細胞裂解液中的標準桿數（PAR化蛋白）被抗體捕獲。隨后與抗標準桿數一抗和HRP標記的二抗孵育。加入化學發光HRP底物后產生發光信號，該信號與細胞提取物中標準桿數的含量直接相關。

一、核心原理與檢測性能

該試劑盒采用夾心ELISA原理，專用于定量檢測細胞提取物中的總多聚ADP-核糖化水平。其獨特之處在于提供了PAR標準品，用戶可據此建立標準曲線，實現絕對定量。檢測范圍經驗證在100 pM至20 nM PARylation區間內呈良好線性關系，確保了實驗結果的精確性與可重復性。

試劑盒采用96孔板形式，包含實驗所需的全部核心組分：特異性抗體、封閉緩沖液、檢測試劑以及作為質控的細胞裂解物。這種“開箱即用”的設計極大簡化了實驗流程，減少了因自行配制試劑引入的批次間差異。

二、適用場景與主要應用

該試劑盒主要面向以下三類核心應用場景：

1. 培養細胞中總PAR水平的定量分析：研究人員可直接處理貼壁或懸浮培養細胞，裂解后利用試劑盒測定不同處理條件下細胞內PARylation的總體變化。

2. PARP或PARG抑制劑在細胞中的IC50測定：在藥物篩選過程中，通過梯度處理候選化合物，可便捷計算出抑制劑的半數抑制濃度，為構效關系研究提供關鍵數據。

3. 細胞模型中PARP或PARG抑制劑的藥效驗證：除單純的活性測定外，該試劑盒還可用于評估抑制劑在真實細胞環境中的作用效果，驗證其是否如預期般降低PARylation水平，從而關聯到細胞表型變化。

三、操作流程與所需配套材料

盡管試劑盒提供了核心檢測試劑，用戶仍需自行準備以下關鍵輔助材料以獲得最佳結果：

改良RIPA裂解液（中強度）（BPS Bioscience 82126）：用于充分提取細胞蛋白，同時維持PAR修飾的穩定性。

LysA蛋白酶抑制劑混合物試劑盒（BPS Bioscience 82199）：防止蛋白降解，保證檢測準確性。

ADP-核糖化循環抑制劑混合物（82130）或完全ADP-核糖化循環抑制劑混合物（82539）：這兩項尤其重要——由于細胞內存在動態的PAR合成與降解循環，加入抑制劑可“凍結”取樣瞬間的PARylation真實水平，避免在樣品處理過程中因內源性PARG或ARH3活性導致信號衰減。

基本操作流程包括：細胞接種與藥物處理 → 裂解液（含抑制劑）裂解 → 蛋白定量 → 加入預包被板孵育 → 檢測抗體結合 → 化學發光底物顯色 → 酶標儀讀數 → 依據標準曲線計算PAR濃度。

四、存儲穩定性與運輸條件

試劑盒采用-80°C超低溫運輸，所有組分在收貨后按指示存儲條件下，自收貨之日起6個月內保持最佳性能。用戶需特別注意：反復凍融可能降低試劑活性，建議首次解凍后分裝保存。

五、注意事項與局限性

特異性：該試劑盒僅檢測多聚ADP-核糖化（PARylation），無法識別單ADP-核糖化（MARylation）。若研究重點為單修飾，需選擇其他專用工具。

線性范圍：嚴格控制在100 pM–20 nM范圍內定量。超出該范圍的高濃度樣本需進行適當稀釋后重新測定。

物種兼容性：試劑盒設計基于人源細胞體系，但在模式生物（如小鼠、大鼠）細胞中的交叉反應性需用戶自行驗證。

六、文獻參考

Marques M., et al., 2019 Oncogene 38 (12): 2177-2191.

James D. I., et al., 2016 ACS Chem Biol 11 (11): 3179-3190.

Drown B. S., et al., 2018 Cell Chem Bio 25 (12): 1562-1570.