糖尿病模型研究工具：Mouse Insulin ELISA/小鼠胰島素ELISA試劑盒

ALPCO-Mouse Insulin ELISA/小鼠胰島素ELISA試劑盒：用于定量測定小鼠血清和血漿中的胰島素。

艾美捷Mouse Insulin ELISA/小鼠胰島素ELISA試劑盒（80-INSMS-E01）檢測原理：

ALPCO小鼠胰島素ELISA是一種夾心型免疫分析方法。96孔微孔板被涂覆以特異性胰島素單克隆抗體。標準品、對照品和樣本被加入到微孔板孔中與結合物一起。然后微孔板在室溫下放置在微孔板振蕩器上，以700-900轉每分鐘的速度振蕩。第一次孵育完成后，孔被洗滌并擦干。接著加入TMB底物，微孔板再次在室溫下放置在微孔板振蕩器上，以700-900轉每分鐘的速度振蕩。第二次孵育完成后，加入終止液，并在450納米處用分光光度計測量光密度（OD）。產生的色度強度與樣本中的胰島素量成正比。

所需材料：

- 用于分配高達100微升的精密移液管（帶一次性吸頭）

- 用于分配高達100微升的重復或多通道移液管

- 用于試劑準備的量筒和移液管

- 用于試劑準備的蒸餾水或去離子水

- 微孔板洗滌器或洗滌瓶

- 能夠以700-900轉每分鐘速度振蕩的微孔板振蕩器

- 帶有450納米濾光片的微孔板讀取器

- 用于樣本準備的漩渦混合器

注意事項：

1. 該試劑盒中包含的人血液制品已檢測HIV（人類免疫缺陷病毒）、HBV（乙型肝炎病毒）和HCV（丙型肝炎病毒）的存在。這些病毒的檢測方法不能保證病毒的缺失；因此，所有試劑應被視為潛在感染性。處理和處置應遵循所有適當的國家和地方法規，以處理潛在的生物危害材料。

2. 所有源自動物的材料均為BSE陰性。然而，所有材料應被視為潛在感染性。

3. 避免直接與皮膚接觸。

4. 本產品不可內服。

5. 使用本產品時，避免進食、飲水或吸煙。

6. 不要口吸任何試劑。

7. 試劑盒中的試劑是特定批次的，不得替換。

8. 不要使用超過有效期的試劑。

9. 不建議更改測試程序，可能會影響測試結果。

測試程序：

所有試劑和微孔板條應在使用前平衡至室溫（18-25°C）。使用前輕輕混合所有試劑。每次運行測試時，如果同時使用多個微孔板，則每個微孔板都必須進行標準曲線測試。所有標準品、對照品和樣本應以雙份運行。

1. 在打開鋁箔袋之前，應將微孔板平衡至室溫。為標準品、對照品和樣本的雙重測定指定足夠的微孔板條。剩余的微孔板條應存放在含有干燥劑的密封鋁箔袋中，存放在2-8°C。

2. 將每個標準品、對照品和樣本的10微升分別滴入相應的孔中。有關對照品重組說明，請參閱試劑準備和分析證書。

3. 向每個孔中滴入75微升的工作強度結合物（見試劑準備）。

4. 用板封蓋覆蓋微孔板，并在室溫下振蕩器上以700-900轉每分鐘的速度振蕩，孵育2小時。

5. 倒掉孔中的內容，并使用微孔板洗滌器用每個孔350微升的工作強度洗滌緩沖液洗滌微孔板6次（見試劑準備）?；蛘?，使用配備洗滌噴嘴的洗滌瓶將工作強度洗滌緩沖液注入孔中。（不建議使用多通道移液管。洗滌液必須以足夠且相等的力量分配，以便正確洗滌孔。）在洗滌之間，倒置微孔板以丟棄液體，并在吸水紙上用力拍打倒置的微孔板。在最后一次洗滌后（自動或手動），通過倒置并在吸水紙上用力拍打微孔板，從孔中去除任何殘留的洗滌緩沖液和氣泡。

6. 向每個孔中滴入100微升的TMB底物。

7. 用板封蓋覆蓋微孔板，并在室溫下振蕩器上以700-900轉每分鐘的速度振蕩，孵育15分鐘。

8. 向每個孔中滴入100微升的終止液，并輕輕搖晃微孔板以混合內容物。在進行下一步之前，去除任何氣泡。

9. 將微孔板放入能夠讀取450納米處吸光度的微孔板讀取器中。微孔板應在加入終止液后立即分析，且不超過30分鐘。

結果計算：

從標準品構建標準曲線。將零點作為曲線的一部分。建議使用軟件程序計算標準曲線并確定樣本的濃度。

ALPCO小鼠胰島素ELISA是一種配體結合測定，其響應與分析物濃度呈S形關系。目前接受的此類曲線的參考模型使用5參數邏輯（pl）擬合，因為此模型可以在更大范圍內優化準確性和精確性。盡管三次樣條和其他模型是可以接受的方法，但它們通常在范圍的低端和高端顯示出較低的內部測試準確性和精確性。

在以下示例中，使用了5 pl曲線擬合來最大化低濃度樣本的準確性和精確性。然而，由于個體實驗室條件的影響，所有模型的準確性和精確性在可檢測范圍的最低端和最高端都是有限的。因此，在解釋分析物響應變為非線性時的結果時，始終需要謹慎。

不建議將樣本濃度值外推至標準濃度值范圍之外。

文獻參考：

Finlay JWA, Dillard RF. Appropriate Calibration Curve Fitting in Ligand Binding Assays. AAPS Journal. 2007; 9(2): E260-E267.

短期測定方案：