PD-L1/TCR激活劑-CHO重組細胞系：細胞培養協議方案

PD-L1/TCR激活劑CHO重組細胞系是組成型表達人PD-L1的CHO-K1細胞系（程序性細胞死亡1配體1、CD274或B7同源物1（B7-H1），GenBank登錄號NM_014143）和工程TCR（T細胞受體）激活劑。

在共培養試驗中，該細胞系用抗PD-1和抗PD-L1中和抗體進行了功能驗證。

艾美捷PD-L1/TCR激活劑-CHO重組細胞系（#60536）：

細胞培養協議

細胞解凍

1. 從液氮儲存中取出一個細胞瓶，保持在干冰上直到準備解凍。

2. 準備解凍時，將冷凍細胞瓶在37°C水浴中輕輕搖動約60秒。一旦細胞解凍（可能比60秒稍快或稍慢），立即將瓶內全部內容物迅速轉移到一個空的50 ml錐形管中。

**注意：細胞在37°C水浴中停留過久會導致活力迅速喪失。

3. 使用10 ml的血清學移液管，將10 ml預熱的解凍培養基3緩慢加入含有細胞的錐形管中。解凍培養基3應逐滴加入，同時輕輕搖動錐形管以允許溫和混合，避免滲透性沖擊。

4. 立即以300 x g離心5分鐘，移除培養基，用5 ml預熱的解凍培養基3重懸細胞。

5. 將重懸的細胞轉移到T25瓶或T75瓶中，在37°C、5% CO2培養箱中培養。

6. 培養24小時后，檢查細胞的貼壁和活力情況。更換為新鮮的解凍培養基3，并繼續在37°C、5% CO2培養箱中培養，直到細胞準備好進行傳代。

7. 細胞應在完全匯合前進行傳代。在第一次傳代及后續傳代中，使用生長培養基3A。

細胞傳代

1. 吸去培養基，用不含Ca2+/Mg2+的磷酸鹽緩沖液（PBS）洗滌細胞，并用0.25%胰蛋白酶/EDTA將細胞從培養容器中分離。

2. 細胞脫落后，加入生長培養基3A并轉移到試管中。

3. 以300 x g離心5分鐘，移除培養基，用生長培養基3A重懸細胞。

4. 按推薦的傳代比例1:10至1:20每周兩次接種到新的培養容器中。

細胞凍存

1. 吸去培養基，用不含Ca2+/Mg2+的PBS洗滌細胞，并用0.25%胰蛋白酶/EDTA將細胞從培養容器中分離。

2. 細胞脫落后，加入生長培養基3A并計數細胞。

3. 以300 x g離心5分鐘，移除培養基，用4°C的細胞凍存培養基（BPS Bioscience #79796）重懸細胞，濃度約為2×10^6個細胞/ml。

4. 將1 ml細胞懸液分裝到每個冷凍管中，將試管放入保溫容器中緩慢冷卻，并在-80°C下過夜保存。

5. 第二天將試管轉移到液氮中進行長期保存。

注意：建議在早期傳代時擴增細胞，并至少凍存10管以備后續使用。

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