GLP-1（活性7-36）ELISA試劑盒檢測原理和操作注意事項說明

GLP-1（活性7-36）ELISA試劑盒高靈敏度試劑盒用于定量測定血漿樣本中的生物活性胰高血糖素樣肽-1（7-36）[GLP-1（7-36）]水平。GLP-1肽的主要氨基酸序列在哺乳動物物種中是相同的，即大鼠、小鼠、豬、人等。該試劑盒僅供研究使用。不用于診斷程序。

艾美捷GLP-1（活性7-36）ELISA試劑盒（ALP-43-GP1HU-E01）檢測原理：

本ELISA試劑盒旨在用于定量測量血漿樣本中的生物活性GLP-1（7-36）。該檢測采用雙位點“夾心”技術，使用兩種選定的GLP-1（7-36）特異性抗體。標準品、對照品和測試樣本直接加入到已涂有鏈霉親和素的微孔板孔中。隨后，向每個孔中加入生物素標記的GLP-1（7-36）特異性抗體和辣根過氧化物酶（HRP）標記的GLP-1（7-36）特異性抗體的混合物。在第一次孵化期后，形成“鏈霉親和素 – 生物素抗體 – GLP-1(7-36) – HRP標記抗體”的“夾心”免疫復合物，并附著在板壁上。在隨后的洗滌步驟中去除未結合的HRP標記抗體。為了檢測這種免疫復合物，每個孔隨后與底物溶液孵育，在定時反應后，使用分光光度計微孔板閱讀器進行測量。與微孔板孔壁上GLP-1（7-36）結合的免疫復合物的酶活性與樣本中GLP-1（7-36）的含量成正比。

試劑：配制和儲存

試劑盒在收到后必須存放在2-8°C。有關試劑盒的有效期，請參考試劑盒盒上的標簽。所有組分在有效期前都是穩定的。

1. 鏈霉親和素包被微孔板（10040B）

涂有鏈霉親和素的微孔板。

數量：1 x 96孔微孔板

儲存：2-8°C

配制：即用型

2. GLP-1追蹤抗體（30229）

穩定蛋白質基質中HRP標記的抗GLP-1特異性抗體。

數量：1 x 0.6 mL

儲存：2-8°C

配制：使用前必須與GLP-1（7-36）捕獲抗體（30230）和追蹤抗體稀釋液（30017）混合。

3. GLP-1（7-36）捕獲抗體（30230）

生物素標記的GLP-1（7-36）特異性抗體。

數量：1 x 0.6 mL

儲存：2-8°C

配制：使用前必須與GLP-1追蹤抗體（30229）和追蹤抗體稀釋液（30017）混合。

4. ELISA洗滌濃縮液（10010）

含有非氮化物防腐劑的磷酸鹽緩沖液中的表面活性劑。

數量：1 x 30 mL

儲存：2-8°C

配制：30倍濃縮。使用前必須用870 mL的蒸餾水稀釋并充分混合。

5. ELISA HRP底物（10020）

含有穩定過氧化氫的四甲基聯苯胺（TMB）。

數量：1 x 24 mL

儲存：2-8°C

配制：即用型

6. 終止溶液（30357）

1.0 M 硫酸。

數量：1 x 12 mL

儲存：2-8°C

配制：即用型

7. GLP-1校準品1至6級（30441 – 30446）

含有非氮化物、非汞基防腐劑的液體蛋白質基質中凍干的GLP-1（7-36）。

數量：6 x 瓶

儲存：2-8°C（凍干），<-20°C（重組）。不要超過三次凍融周期。

配制：必須用1 mL的蒸餾水重組，靜置10分鐘，然后通過翻轉或輕輕渦旋混合。使用前確保所有固體完全溶解。

8. GLP-1對照品（30447 – 30448）

含有非氮化物、非汞基防腐劑的液體蛋白質基質中凍干的GLP-1（7-36）。

數量：2 x 瓶

儲存：2-8°C（凍干），<-20°C（重組）。不要超過三次凍融周期。

配制：必須用1 mL的蒸餾水重組，靜置10分鐘，然后通過翻轉或輕輕渦旋混合。使用前確保所有固體完全溶解。

9. 追蹤抗體稀釋液（30017）

用于追蹤抗體稀釋

數量：1 x 12 mL

儲存：2-8°C

配制：即用型。

操作注意事項：

1. 未能按照上述方法收集樣本可能會導致由于內源性DPP4活性而出現錯誤結果。

2. 建議所有標準品、對照品和未知樣本都要進行雙份檢測。應使用每份重復的平均吸光度讀數進行數據分析和結果計算。

3. 對于濃度高于6級標準品的樣本，建議使用適當的無GLP-1緩沖基質（例如標準零）進行稀釋，以獲得更準確的結果。

4. 光敏感試劑應保存在原始的琥珀色瓶中。

5. 將未使用的鏈霉親和素包被條存放在帶有干燥劑的鋁箔拉鏈袋中，以防止受潮。

6. 仔細的技術和正確校準的移液設備對于確保測試的可重復性是必要的。

7. 與本說明書中所述不同的孵化時間或溫度可能會影響結果。

8. 避免在微孔中產生氣泡，因為這可能會導致結合效率降低和重復讀數的變異系數（%CV）增加。

9. 使用前應輕輕且徹底地混合所有試劑，避免產生泡沫。