PMA-qPCR/Viability PCR工作原理&相關推薦

PMA是比較中肯的v-PCR 染料，并已在數百份同行評審的論文和大量細菌、真菌和病毒菌株中得到驗證。早期研究側重于細菌中的v-PCR，驗證了在數十種不同細菌菌株中的程序，例如大腸桿菌、李斯特菌、軍團菌、乳酸桿菌、結核分枝桿菌、衣原體、幽門螺桿菌以及許多其他與人類健康相關的菌株. v-PCR 在細菌中的應用非常廣泛，但也有許多引文在酵母和真菌、病毒以及各種其他細胞類型（如古生菌、變形蟲和寄生蟲）中使用 v-PCR。

已驗證的Viability PCR應用實例：

微生物組研究

環境測試

益生菌研究

臨床測試

食品和水衛生

葡萄酒發酵

微生物測序

V-PCR的工作原理

PMAxx 和PMA是對DNA具有高親和力的光活性染料。染料插入dsDNA并在暴露于強烈可見光時形成共價鍵。該反應通過在純化過程中去除修飾的DNA和通過DNA聚合酶抑制模板擴增的組合來抑制修飾的DNA模板的PCR擴增。由于染料是細胞膜不可滲透的，當用染料處理含有活細菌和死細菌的樣品時，只有細胞膜受損的死細菌才容易受到DNA修飾。在qPCR反應中，死細胞DNA將顯示出延遲擴增和比活細胞更高的Ct。

活性PCR染料，如PMAxx 或PMA是膜不滲透的，這使它們具有死細胞特異性。一旦進入死細胞，它們就會與DNA結合。暴露在強烈的可見光下會使染料具有活性，并使它們共價附著在DNA上，這種DNA修飾防止了隨后的PCR反應中的擴增。

v-PCR工作流程：

v-PCR的基本工作流程如下圖所示（詳細協議可在產品頁面上找到）。它適用于許多不同的樣本類型和實驗設置。對于少量培養物，樣品可以在微型離心管中制備，并在PMA-Lite 2.0 LED光解裝置中暴露在光下。

艾美捷 Viability PCR入門套件

可定制的 Viability PCR 入門套件包含使用 PMA 或 PMAxx 活力染料和 qPCR 選擇性檢測活細胞所需的材料。這些試劑盒可用于您選擇的任何細胞類型（有關已發布的經過驗證的細胞類型，請參閱PMA/PMAxx 參考列表和經過驗證的細菌菌株列表）。所有試劑盒均包含 Forget-Me-Not EvaGreenqPCR Master Mix，以及您選擇的 PMA 或 PMAxx 染料。您還可以選擇帶有或不帶有革蘭氏陰性細菌增強劑（不適用于其他細胞類型）的試劑盒。用戶將需要提供自己的引物來擴增他們感興趣的物種（請參閱此 博客文章 用于引物設計考慮）。每個試劑盒包含的試劑足以處理 80 種細菌培養物并進行200次PCR反應。

試劑盒包括：

PMA 染料或 PMAxx 染料

Forget-Me-Not EvaGreen qPCR預混液

ROX 參考染料

PMA 增強劑（僅限革蘭氏陰性菌株）

相關推薦：

名稱 貨號 活性染料

Viability PCR Starter Kit with PMA 31075

Viability PCR Starter Kit with PMAxx 31075-X

Viability PCR Starter Kit with PMA and Enhancer 31076

Viability PCR Starter Kit with PMAxx and Enhancer 31076-X

Biotium公司是一家在熒光技術領域獨樹一幟的生物技術公司，公司位于美國加利福尼亞的BAY AREA------中外知名首要的生物科技中心。該公司一直致力于開發和生產用于生物醫學研究的熒光指示劑及其他特殊生化產品。其產品被廣泛應用于細胞生 物學、蛋白質組學、分子生物學、免疫學、微生物學、診斷學、生物化學、神經科學、血液流動檢測及大規模藥物篩選等眾多領域。Biotium公司專利產品眾多，包括已經被廣泛使用的實時PCR定量熒光染料EvaGreen、具有劃時代意義的凝膠核酸染料Gel Red和GelGreen，以及最新推出的Cheetah Taq熱啟動酶和CF系列蛋白質標記染料等。 n目前，Biotium已將其許多專利技術授權給一些主要的國際生物技術公司，包括安捷倫、BD生物科學、Biolegend、BioRad、EMD Millipore、Illumina、PerkinElmer、Qiagen、Roche、Sartorius AG、Sigma-Aldrich、Thermo Fisher Scientific等。