VGAT-131 008：優化的抑制性神經末梢標記工具

在神經科學研究中，準確識別和定位抑制性神經元及其突觸結構是理解中樞神經系統功能環路的基礎。囊泡性GABA轉運蛋白（VGAT）是目前公認的最可靠的抑制性神經末梢標志物，而基于該靶點開發的抗體工具直接影響實驗結果的可靠性。本文介紹的由艾美捷代理Synaptic Systems推出的VGAT抗體（Cat. No. 131 308）是一種經過優化的嵌合重組抗體，在保留經典單克隆抗體特異性的同時，提升了實驗操作的兼容性。

一、靶點生物學意義：為何選擇VGAT

VGAT，又稱囊泡性抑制性氨基酸轉運蛋白（VIAAT），是負責將GABA和甘氨酸轉運進入突觸囊泡的關鍵蛋白。與位于質膜上的神經遞質轉運體不同，VGAT定位于突觸囊泡膜，利用囊泡膜兩側的質子電化學梯度驅動底物轉運，從而實現抑制性遞質在突觸前末梢的儲存與定量釋放。

在哺乳動物中樞神經系統中，抑制性突觸傳遞主要依賴GABA能或甘氨酸能神經元。由于目前尚未發現其他功能性異構體，VGAT已成為識別這兩類抑制性神經末梢的通用且特異的分子標志物。無論是用于突觸亞細胞定位、抑制性環路示蹤，還是病理狀態下抑制性突觸可塑性的研究，高質量的VGAT抗體都是不可或缺的研究工具。

二、產品設計與技術優勢

該抗體（克隆號Gp117G4）基于經典的鼠單克隆抗體117G4改造而來，是一種嵌合重組抗體。其重鏈和輕鏈的恒定區被替換為豚鼠特異性序列，而抗原結合的可變區保持不變。這一設計帶來以下優勢：

1. 兼容性提升：改造后的抗體可兼容標準的抗豚鼠二抗體系，為免疫組化、免疫細胞化學等基于二抗檢測的實驗提供了更多選擇，尤其適合多色標記實驗中需與小鼠來源抗體進行區分的場景。

2. 重組表達體系：抗體在哺乳動物細胞中重組表達，避免了雜交瘤細胞培養過程中可能出現的批次間差異，確保產品的一致性與可重復性。

3. 敲除驗證：產品經過基因敲除（K.O.）驗證，證明其識別特異性，排除了與非靶蛋白的交叉反應風險，這是抗體質量控制的關鍵標準。

三、產品規格與儲存條件

產品以凍干粉形式提供，每管含50 g純化的重組IgG。配方中添加了白蛋白和疊氮鈉以維持穩定性。凍干狀態下應儲存于+4℃，切勿冷凍。使用前需用50 l無菌水復溶，得到濃度為1 mg/ml的TBS緩沖液體系，之后可分裝保存于-20℃至-80℃。分裝后可避免反復凍融導致的效價下降，分裝后的工作液建議在短期內使用完畢。

四、應用驗證與推薦稀釋比例

該抗體在多種檢測體系中均通過驗證，具體推薦稀釋比例如下：

免疫印跡（WB）：1:1000，采用堿性磷酸酶（AP）染色體系。需特別注意，為避免蛋白質聚集，樣本在SDS-PAGE前不應進行加熱處理。這是因為VGAT蛋白在加熱條件下可能形成聚集體，影響電泳分離和抗體識別。

免疫細胞化學（ICC）：1:500，適用于培養細胞中VGAT的定位分析。

免疫組織化學（IHC）：1:500，適用于冷凍切片的常規免疫組化染色。

石蠟切片免疫組化（IHC-P）：1:400，適用于福爾馬林固定、石蠟包埋組織的抗原檢測。

上述稀釋比例為起始優化推薦值，實際實驗中可根據樣本豐度、固定條件、檢測系統靈敏度等因素進行適當調整。

五、種屬反應性與免疫原信息

該抗體識別位于大鼠VGAT氨基末端附近的一段合成肽段（對應UniProt ID O35458）。經驗證，其可檢測人類（Q9H598）、大鼠（O35458）、小鼠（O35633）、豚鼠及猿類的VGAT蛋白，涵蓋主要嚙齒類動物模型及人類樣本，為轉化醫學研究提供了跨種屬應用的便利。

ICC文獻：

MAD2B promotes podocyte injury through regulating Numb-dependent Notch 1 pathway in diabetic nephropathy.

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The synaptic scaffold protein MPP2 interacts with GABAA receptors at the periphery of the postsynaptic density of glutamatergic synapses.

Schmerl B, Gimber N, Kuropka B, Stumpf A, Rentsch J, Kunde SA, von Sivers J, Ewers H, Schmitz D, Freund C, Schmoranzer J, et al.

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IHC文獻：

Repetitive concussions promote microglia-mediated engulfment of presynaptic excitatory input associated with cognitive dysfunction.

Chahin M, Mutschler J, Dzhuleva SP, Dieterle C, Jimenez LR, Bhattarai SR, Van Steenbergen V, Bareyre FM

Communications biology (2025) 81: 335. 131 308 IHC; tested species: mouse

Astrocyte specification in the mouse septum is shaped by both developmental origin and local signals.

Xie Y, Reid CM, Turrero Garc?a M, Dale-Huang F, Granados AA, Lu Y, Li J, Hanson SM, Mancia Leon WR, Liu J, Adam M, et al.

Nature neuroscience (2025) 288: 1676-1687. 131 308 IHC; tested species: mouse