Enzyme Research Laboratories：Human Prothrombin(人凝血酶原)

近期, Deyan等發表的標題為“Protective Roles for Fibrin, Tissue Factor, Plasminogen Activator Inhibitor-1, and Thrombin Activatable Fibrinolysis Inhibitor, but Not Factor XI, during Defense against the Gram-Negative Bacterium Yersinia enterocolitica”，發表在《The Journal of Immunology》期刊上。這篇文章的核心內容是研究在防御革蘭氏陰性細菌耶爾森腸炎桿菌（Yersinia enterocolitica）感染過程中，纖維蛋白、組織因子（TF）、纖溶酶原激活物抑制劑-1（PAI-1）和凝血酶激活的纖溶抑制劑（TAFI）等凝血因子的保護作用，而因子XI則沒有保護作用。文章指出，在敗血癥感染中，凝血途徑的失調會導致凝血病。盡管抗凝治療通常無法保護人類免受敗血癥病理的影響，但本研究的數據可能有助于解釋這一差異，即在宿主防御過程中，導致纖維蛋白沉積的凝血途徑具有關鍵的保護作用.

方法

實驗動物

使用了C57BL/6野生型小鼠以及基因敲除小鼠，包括纖維蛋白原敲除小鼠、PAI-1敲除小鼠、因子XI敲除小鼠和TAFI敲除小鼠等。

低TF活性小鼠（low-TF mice）是通過基因靶向技術使小鼠TF基因失活，并表達人類TF轉基因，從而具有低水平的TF活性。

PAI-1/TAFI雙敲除小鼠是在Trudeau研究所生成的。

細菌感染

使用Y. enterocolitica菌株WA（血清型O:8），在26℃下培養至對數生長期早期，然后在含有20%甘油的BHI肉湯中重懸并儲存于-70℃。

通過腹腔注射（i.p.）或靜脈注射（i.v.）的方式將細菌接種到小鼠體內，以研究不同感染途徑下的反應。

生存率和細菌負荷測量

每天監測小鼠的生存情況，對無反應或臥倒的小鼠視為瀕死并進行安樂死。

通過在BHI瓊脂上涂布組織勻漿的稀釋液并計數菌落形成單位（CFU）來測量細菌負荷。

血液參數、纖維蛋白沉積和肝臟PT及PA活性測量

通過心臟穿刺收集血液，測量血細胞比容和血小板數量。

通過ELISA測量血漿中的D-二聚體水平，并通過Western blot定量肝臟組織中的纖維蛋白水平。

使用特定的試劑盒和方法測量肝臟組織中的凝血酶原酶（PT）和纖溶酶原激活物（PA）活性。

實驗

纖維蛋白原對腹腔炎癥反應的影響：

通過比較纖維蛋白原敲除小鼠和對照小鼠在感染Y. enterocolitica后的腹腔滲出液中的炎癥介質和細胞數量，發現纖維蛋白原敲除小鼠的炎癥反應減弱，中性粒細胞數量減少，細菌負荷增加。

纖維蛋白在腹腔耶爾森病中的保護作用：

纖維蛋白原敲除小鼠在感染亞致死劑量的Y. enterocolitica后，生存率顯著降低，肝臟和脾臟中的細菌負荷增加。

使用華法林處理的野生型小鼠也表現出類似的表型，表明纖維蛋白在防御革蘭氏陰性腹膜炎中具有保護作用。

纖維蛋白在全身耶爾森病中的保護作用：

通過靜脈注射Y. enterocolitica，發現纖維蛋白原敲除小鼠的生存率顯著降低，肝臟和脾臟中的細菌負荷增加，表明纖維蛋白在全身感染中也具有保護作用。

纖維蛋白沉積的動態變化：

在野生型小鼠感染Y. enterocolitica后，肝臟中的纖維蛋白沉積在感染的第5天達到峰值，與細菌負荷最大值相吻合。

TF和FXI在耶爾森病中的作用：

低TF活性小鼠在感染后表現出增加的細菌負荷和降低的生存率，而因子XI敲除小鼠則沒有表現出這些表型，表明TF依賴的外源凝血途徑在宿主防御中起主導作用。

PAI-1和TAFI在耶爾森病中的協同保護作用：

PAI-1和TAFI的表達在感染過程中增加，且PAI-1/TAFI雙敲除小鼠在感染后表現出更高的細菌負荷和更低的生存率，表明PAI-1和TAFI在調節纖溶過程中具有協同作用。

結論

文章的結論是，在防御耶爾森腸炎桿菌感染的過程中，纖維蛋白、組織因子、纖溶酶原激活物抑制劑-1和凝血酶激活的纖溶抑制劑具有關鍵的保護作用，而因子XI則沒有保護作用。這些發現強調了在革蘭氏陰性敗血癥期間，針對主要的凝血酶生成或抗纖溶途徑的治療可能會破壞纖維蛋白介導的宿主防御。因此，在開發治療敗血癥的藥物時，需要充分考慮凝血途徑在感染中的調節作用，以確保既能有效抑制凝血病，又不破壞保護性的纖維蛋白沉積.

Enzyme Research Laboratories品牌產品的作用和價值：

在實驗中，Enzyme Research Laboratories品牌的以下產品發揮了重要作用：

Human Prothrombin(人凝血酶原)(Cat# HP 1002): 

在測量肝臟組織中的凝血酶原酶（PT）活性時，使用了人凝血酶原來進行體外測定。凝血酶原是凝血過程中關鍵的前體蛋白，通過與組織因子和因子VIIa復合物相互作用，啟動外源凝血途徑，最終轉化為凝血酶，促進纖維蛋白的形成。在實驗中，通過將人凝血酶原與小鼠肝臟切片共孵育，可以定量測量凝血酶的生成，從而評估肝臟組織的凝血活性。

Purified Human a-Thrombin(純化的人凝血酶)(Cat# HT 1002a):

作為凝血酶活性測定的標準品，純化的人凝血酶用于建立標準曲線，以便準確測量實驗中生成的凝血酶水平。凝血酶是凝血過程中的關鍵酶，能夠催化纖維蛋白原轉化為不溶性纖維蛋白，形成血栓。通過與Spectrozyme TH試劑反應，可以定量測量凝血酶的活性，從而評估肝臟組織的凝血功能。

Human Glu-Plasminogen(人Glu-纖溶酶原)(Cat# HT 1002a):

在測量肝臟組織中的纖溶酶原激活物（PA）活性時，使用了人Glu-纖溶酶原作為底物。纖溶酶原是纖溶系統中的關鍵前體蛋白，通過纖溶酶原激活物的作用，轉化為纖溶酶，進而降解纖維蛋白，溶解血栓。在實驗中，將人Glu-纖溶酶原與小鼠肝臟切片共孵育，可以定量測量纖溶酶的生成，從而評估肝臟組織的纖溶活性。

Human Plasmin(人纖溶酶)(Cat# HPlasmin):

作為纖溶酶活性測定的標準品，純化的人纖溶酶用于建立標準曲線，以便準確測量實驗中生成的纖溶酶水平。纖溶酶是纖溶系統中的關鍵酶，能夠降解纖維蛋白，溶解血栓。通過與Spectrozyme PL試劑反應，可以定量測量纖溶酶的活性，從而評估肝臟組織的纖溶功能。

這些產品在實驗中的價值在于，它們為研究人員提供了準確、可靠的工具來測量和分析小鼠肝臟組織中的凝血和纖溶活性。通過使用這些標準化的試劑，研究人員能夠獲得精確的數據，從而深入理解纖維蛋白在宿主防御中的作用機制，以及凝血和纖溶途徑在感染過程中的調節作用。這對于開發針對敗血癥和相關凝血病的治療策略具有重要意義。