BPS Bioscience：OX40工具-OX40L藥物發現

免疫檢查點OX40，也稱為CD134或TNFRSF4，是屬于腫瘤壞死因子受體（TNFR）超家族的共刺激分子。其在調節免疫應答中的重要性在免疫治療領域引起了廣泛關注。OX40信號傳導在調節T細胞活化、分化和存活中起關鍵作用，從而影響針對病原體和腫瘤的免疫應答的結果。本技術說明旨在闡明OX40信號轉導的機制及其對免疫治療的影響。

OX40信號通路

OX 40主要由活化的CD 4+和CD 8+ T細胞表達，并且在TCR刺激后瞬時誘導。OX 40的活化發生在與其配體OX 40 L（也稱為CD 252、TNFSF 4或gp 34）結合時，其主要在抗原呈遞細胞（APC）如樹突狀細胞、巨噬細胞和B細胞上表達。OX 40 L三聚體誘導OX 40受體聚集，其啟動涉及各種細胞內銜接子和激酶的信號級聯。在配體結合后，OX 40募集TNF受體相關因子（TRAF），特別是TRAF 2和TRAF 5，導致下游信號傳導通路的激活，包括NF-κB、MAPK和PI 3 K/Akt。TRAFs直接與受體簇相互作用，不像許多其他細胞表面信號受體那樣通過磷酸化介導。這些途徑共同促進T細胞增殖、存活和細胞因子產生，從而增強免疫應答。0X 40還在TCR活化的情況下充當共刺激受體。當兩種受體都參與時，OX 40信號傳導增強Akt通路的激活，進一步放大生長和存活信號。

圖1. 0X40：不依賴于TCR信號傳導的0X40L信號傳導途徑。改編自Croft，M. 2010年（1).

OX40驅動T細胞亞群的功能多樣性

OX 40在多種輔助性T細胞亞群上表達，特別是Th 2、Th 1、Th 17、Tfh以及調節性T細胞（Tfh）（2）。具體而言，OX 40-OX 40 L信號可以增強Th 1介導的免疫應答，促進Th 2應答的產生和維持，增強Tfh發育，影響Th 17細胞的IL-17產生，并拮抗Treg產生和Treg介導的抑制。在CD 8+細胞毒性T細胞中，已經發現0X 40接合對于致敏的CD 8+ T細胞的存活和擴增以及它們對抗原刺激的應答是至關重要的。

圖2.跨T細胞亞群的0X40刺激的總結。改編自Fu，Y. et.al. 2020年（2).

免疫治療的意義

OX40信號傳導的失調與各種免疫相關疾病有關，包括自身免疫性疾病和癌癥（2）。在癌癥中，腫瘤細胞通常利用抑制途徑來逃避免疫監視，特別是誘導T細胞耗竭的系統。靶向OX40的免疫抑制策略旨在逆轉這種免疫抑制并增強抗腫瘤免疫，重振腫瘤區室中的T細胞。臨床前研究已經證明了0X40激動劑通過促進效應T細胞活化和記憶形成來增強針對腫瘤的T細胞應答的功效。此外，增加0X40活性可用作疫苗接種中的治療佐劑或用于增強針對病原體（如病毒、真菌或蠕蟲）的免疫力。

幾種0X40激動劑已經進入用于治療各種癌癥的臨床試驗。這些激動劑包括靶向0X40的單克隆抗體、可溶性0X40L融合蛋白和綴合至免疫調節劑或細胞毒性有效載荷的0X40激動劑抗體。早期臨床試驗顯示出有希望的結果，一些患者獲得了持久的反應。然而，諸如脫靶效應和在某些腫瘤類型中的有限療效等挑戰仍有待解決。

鑒于腫瘤免疫逃避機制的復雜性，正在探索涉及0X 40激動劑的組合療法以增強其功效。與其他免疫調節劑（如靶向PD-1/PD-L1或CTLA-4的檢查點抑制劑）的組合旨在克服腫瘤微環境中的多層免疫抑制。此外，已經觀察到與常規癌癥療法（例如化學療法和放射療法）的協同效應，其可以增強腫瘤的免疫原性并使它們對免疫介導的破壞敏感。

另一方面，阻斷OX40信號可能會改善自身免疫性疾病的結果，其中過度活躍的免疫細胞正在驅動病理。一些針對自身免疫的OX40或OX40L的臨床試驗正在進行中。OX40與多種自身免疫性疾病有關，包括系統性紅斑狼瘡（SLE）、類風濕性關節炎（RA）、炎性腸?。↖BD）、自身免疫性實驗性葡萄膜炎（AEU）、1型糖尿病和多發性硬化癥（MS）。事實上，OX40表達在自身免疫位點上調，并與疾病嚴重程度相關。因此，用封閉抗體靶向OX40或OX40L可能是一種理想的治療方法。

圖3.在癌癥和自身免疫中靶向OX40：OX40L的治療策略。在癌癥中，治療將促進T細胞活化，而在自身免疫中，治療將旨在抑制T細胞功能。

OX40工具：OX40L藥物發現

BPS Bioscience提供了一系列工具來加快藥物發現，包括蛋白質，封閉抗體，生化測定和報告細胞系。

對于化合物文庫或抗體篩選和分析，OX40[生物素化]：OX40L抑制劑篩選測定試劑盒（#72045）提供了一種方便的一體化解決方案，具有強大的熒光讀數。

圖4.抗0X 40抗體對0X 40：0X 40 L結合的抑制。用0X 40 L包被平板，然后在增加濃度的抗0X 40抗體存在下與0X 40孵育。使用Bio-Tek酶標儀測量發光。

BPS Bioscience的OX40阻斷抗體適用于您的發現檢測中的質控品。

BPS Bioscience報告細胞系為篩選和分析潛在治療劑提供了生物學相關背景。OX 40/NF-κB熒光素酶報告基因HEK 293細胞系（#60482）提供了相對于低背景對照的清晰信號，從而能夠測定封閉抗體的IC50。使用我們的ONE-Step?熒光素酶檢測系統，研究人員可以運行高通量檢測，以確定通過管道推進的最佳候選物。

圖5. OX 40/NF-κB熒光素酶報告基因HEK 293細胞系的作用機制圖示。

圖6.在存在OX 40 L的情況下，OX 40/NF-κB熒光素酶報告基因HEK 293細胞系對抗OX 40拮抗劑抗體的劑量反應曲線。將細胞與遞增濃度的抗0X 40拮抗劑抗體和400 ng/ml 0X 40 L孵育6小時。使用ONE-Step?熒光素酶測定系統測量熒光素酶活性。結果顯示為熒光素酶報告基因表達的誘導倍數與不存在OX 40 L時細胞活性的關系。

References

1. Croft, M. 2010. Annu Rev Immunol. 28:57-78. Pubmed

2. Fu, Y., et.al. 2020. Act Pharm Sin B. 10:414-433. Pubmed

3. Figures 1, 2, and 3 were created with BioRender.com.