AAT——全套線粒體研究工具，幫你“一網打盡”！

線粒體是存在于所有真核細胞中的獨特的膜結合細胞器，作為ATP生產和細胞能量供應的主要場所，線粒體的獨特方面（包括稱為mDNA的單獨遺傳物質，其自身的蛋白質合成機制以及嚴格調節的膜電位梯度）使其成為重要的研究課題，另外，隨著衰老過程和更多其他人類疾病方面的研究發現，線粒體的作用比以往更加值得我們研究。

這期主要給大家帶來線粒體熒光探針（活細胞和固定細胞），線粒體膜電位探針，ATP檢測，線粒體自噬檢測，線粒體通透性轉換孔（MPTP）檢測相關工具。

一．細胞線粒體染料

1. 用于標記活細胞線粒體的可用MitoLite?染料

2. CytoFix?紅色固定線粒體染色

CytoFix?Red線粒體染色劑增強的細胞維持能力可使線粒體局部熒光得到保持，即使固定過程中線粒體膜電位喪失后也可以保留。該染料產生的熒光信號在溶酶體中得到很好的保留，使其便于長期跟蹤線粒體。CytoFix?紅色線粒體染色劑可與GFP表達的細胞，其他熒光偶聯物和其他細胞器染色劑一起使用，進行多色分析。它既可用于懸浮細胞，也可用于貼壁細胞，并易于適應各種熒光平臺。

CytoFix?Red—適用于固定細胞線粒體染色

二．線粒體膜電位：

1. JC-10?雙發射膜電位（ΔΨm)探針

JC-10?是JC-1的衍生物，是電位依賴性探針，用于通過流式細胞儀，熒光顯微鏡和基于微孔板的熒光測定法確定ΔΨm。在健康細胞中，JC-10?選擇性地聚集在線粒體中，生成橙色的JC聚集體，該聚集體在590 nm處顯示出較寬的激發光譜和最大發射。然而，在具有低ΔΨm的凋亡和壞死細胞中，JC-10?從線粒體中擴散出來，并生成JC-10?單體，導致向綠色發射（525 nm）處轉移。JC-10?允許以定性和定量方式來可視化ΔΨm的變化，分別考慮從橙色到綠色的熒光發射和熒光強度比的變化。它已成功用作多種樣本類型的ΔΨm指示劑，包括肌細胞，神經元等。

JC-10?的特點：

• 易于使用：稀釋到水性緩沖液中時，JC-10?不會沉淀，從而消除了偽影。

• 堅固：JC-10?由于在水性介質中的溶解度提高和靈敏度更高，因此測定偏差較小。

• 增強的信號：JC-10?具有比JC-1高的信噪比。

• 增強的靈敏度：在所有測試的細胞系中，JC-10?能夠比JC-1更好地檢測到ΔΨm損失的細微變化。

• 廣泛的應用：JC-10?可用于原代大鼠肝細胞檢測

• 方便：JC-10?與熒光酶標儀，細胞成像儀和流式細胞儀兼容。

圖3.用JC-10?（貨號22204）和JC-1（貨號22200）在Jurkat細胞中測定了喜樹堿誘導的線粒體膜電位變化。將Jurkat細胞用喜樹堿（10 ?M）處理4小時后，將JC-1和JC-10?染料加載溶液添加到孔中，并孵育30分鐘。使用NOVOstar酶標儀（BMG Labtech）在Ex / Em = 490/525 nm和540/590 nm下測量了JC-1和JC-10?的J聚集體和單體形式的熒光強度。

JC-10?和JC-1雙發射線粒體膜電位探針

2. 線粒體選擇性羅丹明酯

細胞滲透性陽離子羅丹明，例如TMRE和TMRM，很容易被活性線粒體隔離，通常用于標記活細胞中的線粒體。像JC-10?一樣，線粒體中TMRE和TMRM的吸收是由線粒體膜電位驅動的。兩種染料都已成功用于動態和原位定量檢測，用于篩選線粒體通透性轉換孔的抑制劑，評估活細胞中線粒體的功能，并可用于區分活的和死的細胞群，這些電位染料表現出最小的自發淬滅性，低細胞毒性和合理的光穩定性，它們的熒光強度可以用流式細胞儀或熒光顯微鏡進行測量。與TMRM相比，TMRE的疏水性略強。

用于測量線粒體膜電位的電位染料

三．ATP測定：

三磷酸腺苷（ATP）是一種復雜的有機分子，參與細胞的能量生成，代謝調節和細胞信號傳導。它作為主要能源存在于所有活生物體中，并在沒有活生物體的情況下迅速降解。因此，ATP測定是一種有用的工具，可用于各種研究應用程序中，以鑒定活生物體的存在。常見的應用包括細胞活力和細胞毒性，表面細菌的檢測，水中細菌的定量，培養中的體細胞以及食品質量和污染測試。

我們的PhosphoWorks?發光ATP分析提供了一種快速，簡單且均一的生物發光方法，可用于通過ATP檢測確定哺乳動物細胞的細胞活力，細胞毒性和增殖。

用于測量ATP活性，以及生成或消耗：

四．線粒體自噬：

線粒體自噬主要是由去極化線粒體的積累引起的。線粒體作為消除系統，消除了由氧化應激和DNA損傷引起的功能異常的線粒體，導致螯合成自噬體，然后與溶酶體融合并發生降解。

五．線粒體通透性轉換孔（MPTP）：

線粒體通透性轉換孔（MPT孔或MPTP）是由線粒體內膜和內層膜的組分形成的非特異性通道，可能參與細胞凋亡過程中線粒體組分的釋放。在健康細胞中，MPTP在打開和關閉狀態之間轉換，但在細胞死亡期間，MPTP會極大地改變線粒體的通透性。細胞色素c的釋放和線粒體膜電位的丟失發生在連續的孔活化之后。

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