AAT Bioquest/艾美捷丨鏈霉親和素-Xtra? IF488方案

鏈霉親和素偶聯物廣泛用于與生物素偶聯物結合，以檢測多種生物靶標，如蛋白質、核酸和其他分子。它們被用作許多生物檢測的理想選擇，如免疫熒光顯微鏡、流式細胞術、蛋白質印跡和其他生物應用，因為鏈霉親和素具有很強的親和力結合生物素，在很寬的pH值和溫度范圍內不受影響。

AAT Bioquest/艾美捷提供多種用經典熒光染料標記的鏈霉親和素偶聯物（例如：FITC、TRITC、Texas Red?、Cy3?、Cy5? 和 Cy7?），以及我們良好的水溶性、光穩定 iFluor 和 mFluor?? 染料。然而，傳統的生物素-親和素檢測系統仍然受到現有熒光偶聯物信號強度有限的限制。鏈霉親和素 Xtra? iFluor 偶聯物是一個新的超亮鏈霉親和素偶聯物家族，具有與 Alexa Fluor 熒光基團幾乎相同的激發和發射特性，信號改善 3~5 倍。它是一套強大的工具，用于檢測細胞成像或流式細胞術中的低豐度靶標。iFluor? 488 是 FITC 通道成像中非常常見的綠色熒光顏色之一。

AAT Bioquest鏈霉親和素-Xtra? iFluor? 偶聯物的合適標記程度可產生極為明亮的熒光鏈霉親和素偶聯物，用于在細胞成像、流式細胞術和蛋白質印跡應用中檢測生物素化抗體。鏈霉親和素-Xtra? iFluor 偶聯物對低豐度靶標成像，比傳統鏈霉親和素 Alexa Fluor?? 偶聯物具有更高的靈敏度和細節。

示例協議:

1、儲備溶液的制備:

除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應分成一次性等分試樣，并在制備后儲存在-20°C。避免反復凍融循環

鏈霉親和素-Xtra? IF488儲備溶液（1mg / mL）

向小瓶中加入 100 μL（對于 Cat# 46000）或 1 mL（對于 Cat# 46001）的 ddH 2 O，以制備 1 mg/mL 儲備溶液。

注意：該構成的儲備溶液將在含有 0.2% BSA 的 PBS 中。

2、工作溶液的制備:

鏈霉親和素-Xtra?工作溶液

對于IF，建議的染色濃度為1-5 ug/ml。對于 FACS，染色緩沖液中的建議濃度為 0.1-0.5 ug / 100 uL / 百萬個細胞。

注意：PBS+0.1%BSA可用作染色緩沖液。

注意：為了獲得每種應用的合適的性能，需要仔細確定該試劑的最佳濃度。

注意：建議的工作稀釋度僅供參考。建議用戶在測試中使用適當的陽性和陰性對照滴定產品。

3、樣品實驗方案:

根據制造商的建議，用目標抗體封閉和處理樣品。

在樣品中以適當的濃度和持續時間加入生物素偶聯的二抗工作溶液。

注意：請驗證您的生物素偶聯抗體與實驗中使用的一抗的相容性和類型。例如，如果一抗是小鼠抗體，則可以使用與生物素結合的山羊抗小鼠抗體進行測定。

將細胞與鏈霉親和素-Xtra? 工作溶液在室溫下孵育 30 分鐘至 1 小時。注意：需要仔細確定合適孵育時間。

取出工作溶液，將細胞重懸于您選擇的緩沖液中。

使用熒光顯微鏡拍攝圖像或使用流式細胞儀記錄強度。

AAT Bioquest鏈霉親和素-Xtra? IF488圖像示例：

圖 1. 用鏈霉親和素-Xtra? iFluor 偶聯物和鏈霉親和素 Alexa Fluor? ? 偶聯物染色的 Hela 細胞圖像。

Hela 細胞用 4% 多聚甲醛固定 30 分鐘，用 0.02% Triton? X-100 透化 10 分鐘，用 1% BSA 封閉 1 小時。然后用 1 μg/mL α 微管蛋白小鼠單克隆抗體在室溫下對固定的 Hela 細胞染色 1 小時，然后用 GxM IgG-生物素 （Cat# 16729） 染色，然后用鏈霉親和素-Xtra? iFluor 488 和鏈霉親和素-Alexa Fluor? 488 進行可視化。用 Hoechst 33342（藍色，貨號#17535）對細胞核進行染色。

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