Chondrex：牛II， IX 和 XI 型膠原蛋白

自主神經系統（Autonomic Nervous System, ANS）與免疫系統之間存在著密切的聯系。ANS通過神經纖維直接支配淋巴器官，包括脾臟，從而提供了中樞神經系統（CNS）與免疫系統之間的橋梁。在脾臟中，已知的唯一神經抑制炎癥的機制依賴于由脾臟去甲腎上腺素能纖維產生的去甲腎上腺素，這種去甲腎上腺素與CD4+ T細胞上的β2腎上腺素能受體（β2-ARs）結合，進而觸發乙酰膽堿的釋放。乙酰膽堿隨后通過與髓樣細胞上的α7煙堿型乙酰膽堿受體（α7nAChRs）結合，抑制炎癥細胞因子的分泌。盡管迷走神經抗炎通路在嚙齒類動物中得到了廣泛研究，但尚不清楚是否還存在其他神經通路。

“Apical splenic nerve electrical stimulation discloses an anti-inflammatory pathway relying on adrenergic and nicotinic receptors in myeloid cells”旨在探討脾臟神經在調節炎癥中的作用，并確定是否存在除迷走神經抗炎通路之外的其他神經通路。特別地，研究關注于脾臟神經的解剖和功能特性，以及電刺激這些神經對炎癥的影響。

實驗方法

1. 動物模型與分組：實驗使用了多種小鼠品系，包括C57BL/6、DBA、Foxn1-/-（T細胞缺陷）、Rag1-/-（T和B細胞缺陷）、LysM-Cre:Adrb2fl/fl（髓系細胞β2-ARs敲除）、LysM-Cre:Chrna7fl/fl（髓系細胞α7nAChRs敲除）等。實驗分為多個組別，包括假手術組（SHAM）、不同神經刺激組（如迷走神經刺激、動脈脾神經刺激、頂端脾神經刺激）以及不同基因敲除小鼠組。

2. 神經刺激與參數：使用特制的電極對小鼠的迷走神經、動脈脾神經或頂端脾神經進行電刺激。刺激參數為矩形雙相脈沖，脈沖幅度為650 ?A，脈沖寬度為100 ?s，頻率為10 Hz，持續時間為2分鐘。

3. 生理指標監測：在麻醉小鼠中監測頸動脈血壓和心率，以評估神經刺激對心血管系統的影響。

4. 炎癥模型與評估：使用脂多糖（LPS）誘導小鼠內毒素血癥模型，通過檢測血清中腫瘤壞死因子（TNF）水平評估炎癥反應。此外，還使用了II型膠原（品牌chondrex, 貨號20022）和與弗氏完全佐劑（貨號:7009， 完全弗氏佐劑，2mg/ml）混合后免疫DBA小鼠，成功誘導了關節炎，通過臨床評分、組織病理學分析等方法評估關節炎的嚴重程度。

 如上圖：DBA小鼠在第0天用II型膠原蛋白進行免疫接種，并將電極植入第11天脾臟頂部的脾神經。在第21天，用II型膠原蛋白對小鼠進行加強免疫在35天內每2-3天監測一次臨床癥狀。數據顯示關節炎小鼠的百分比（a），平均臨床評分（b）和平均厚度后爪（c）。

實驗結果

1. 神經解剖與功能分析：通過免疫組織化學和激光共聚焦顯微鏡觀察，發現小鼠脾臟有三條神經分支：兩條與動脈相關，包含兒茶酚胺能纖維；另一條位于脾臟頂端，同時包含兒茶酚胺能纖維和膽堿能纖維。電刺激頂端神經而非動脈神經能顯著增加脾臟中ACh的含量，且這種增加不依賴于T細胞。

2. 神經刺激對炎癥的抑制作用：電刺激迷走神經、動脈脾神經或頂端脾神經均能抑制LPS誘導的TNF產生，但機制不同。迷走神經和動脈脾神經刺激依賴于T細胞，而頂端脾神經刺激不依賴于T細胞，且其抑制作用可被β2-ARs和α7nAChRs的拮抗劑所阻斷，表明頂端脾神經刺激通過平行作用于髓系細胞上的β2-ARs和α7nAChRs來抑制炎癥。

3. 頂端脾神經刺激對CIA的抑制作用：在CIA小鼠中，電刺激頂端脾神經顯著延遲了關節炎的發病時間，減輕了疾病嚴重程度，減少了關節腫脹和骨侵蝕，并降低了脾臟中炎癥性單核細胞的數量。這些結果表明，頂端脾神經刺激可能通過抑制全身炎癥反應來減輕關節炎癥狀。

在本研究中，Chondrex品牌的牛II型膠原被用于建立膠原誘導的關節炎（CIA）模型。該模型是關節炎研究中的經典模型之一，能夠模擬關節炎的病理特征和臨床表現。牛II型膠原作為CIA模型的誘導劑，通過與弗氏完全佐劑混合后注射到小鼠體內，成功誘導了關節炎的發生和發展。

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