Epigentek：H3K27去甲基化酶檢測

賴氨酸組蛋白甲基化是最強大的表觀遺傳標記之一，對于多個細胞過程的調節至關重要。H3-K27 的甲基化似乎特別重要，因為它與基因組的抑制區有關。H3-K27 甲基化被認為是不可逆的，直到鑒定出大量組蛋白去甲基化酶表明去甲基化事件在組蛋白修飾動力學中起重要作用。到目前為止，已經鑒定出至少 2 類 H3-K27 特異性組蛋白去甲基化酶，即 JMJD3 （KDM6B） 和 UTX （KDM6A）。JMJD3 和 UTX 可以去除 H3-K27 中的二甲基化和三甲基化。JMJD3 和 UTX 去甲基化酶是包含 JmjC 結構域的蛋白質，通過使用羥基化反應和所需的鐵和 a-酮戊二酸作為輔因子來催化甲基化的去除。

發現 JMJD3 和 UTX 去甲基化酶具有潛在的致癌功能。例如，JMJD3 在前列腺癌中擴增，而 UTX 突變在多種癌癥類型中發現，包括腎癌和多發性骨髓瘤。檢測 JMJD3/UTX 的活性和抑制對于闡明基因激活和沉默的表觀遺傳調控機制非常重要，并有利于癌癥診斷和治療。

原理和程序

表觀酶? JMJD3/UTX去甲基化酶活性/抑制檢測試劑盒（比色法）包含了測量JMJD3/UTX活性/抑制所需的所有試劑。在該測定中，三甲基化組蛋白 H3-K27 底物穩定包被到條帶孔上?；钚?JMJD3/UTX 與底物結合并從底物中去除甲基。JMJD3/UTX 去甲基化產物可以用特異性抗體識別。然后可以通過讀取酶標儀中的吸光度密度 （OD） 來比色測量與酶活性成正比的去甲基化產物的比率或量。JMJD3/UTX 酶的活性與測量的 OD 強度成正比。

表觀酶? JMJD3/UTX 去甲基化酶活性/抑制檢測試劑盒（比色法）是一整套優化試劑，設計用于使用來自多種物種（如哺乳動物、植物、真菌和細菌）的核提取物或純化酶測量 JMJD3 和 UTX 的活性/抑制，形式包括但不限于培養細胞和新鮮和冷凍組織。目前用于檢測 JMJD3/UTX 活性/抑制的方法數量有限。傳統方法基于甲醛釋放量的測量，甲醛釋放是 JMJD3/UTX 酶促反應的副產物，并且具有明顯的弱點：

（1） 需要大量（μg 級）底物和酶;

（2） 不能使用細胞/組織的細胞核提取物;

（3） 氧化還原敏感的 JMJD3/UTX 抑制劑不適合用這種方法進行測試;

（4） SDS、DMSO、含巰基的化學品和離子的高介入性，這些化合物通常包含在酶溶液、測試化合物溶劑和檢測緩沖液中;

（5） 不如直接測量 JMJD3/UTX 轉化的去甲基化產物準確。

表觀酶? JMJD3/UTX 去甲基酶活性/抑制檢測試劑盒解決了這些問題，具有以下優勢：

• 使用 96 Stripwell 微孔板規格進行 3 小時比色程序，可進行手動或高通量分析。

• 通過直接檢測 JMJD3/UTX 轉化的去甲基化產物（而不是副產物），直接測量 JMJD3 或 UTX 活性，從而消除由含巰基的化學物質（如 DTT、GSH 和 2-巰基乙醇）或由去污劑/離子（如 tween-20、SDS、triton X-100、Fe 和 Na）引起的檢測干擾。

• 含有 JMJD3/UTX 去甲基化酶和純化的 JMJD3 或 UTX 蛋白的細胞/組織提取物均可使用，這允許在體內和體外檢測 JMJD3/UTX 抑制劑的抑制作用。

• 靈敏度比基于甲醛釋放的 JMJD3/UTX 檢測高 200 倍，可從低至 10 ng 的純化 JMJD3 和 UTX 酶中檢測到活性。

• 包括去甲基化的 H3-K27 標準品，可以定量 JMJD3/UTX 的比活性。

• 準確、可靠，并與極低的背景信號保持一致。

Epigentek 公司是全球領先的表觀遺傳學相關研究的技術創新者和產品開發供應商。開發了超過700多個專利產品，為表觀遺傳學方面的研究和新藥研發提供全面系統的解決方案，涵蓋樣品制備、DNA/RNA甲基化（5-mc, 5-hmc, 5-fc, m6A）/DNMT分析、ChIP、組蛋白甲基化/乙?；?去乙酰化/磷酸化/SUMO-等領域，提供小分子抑制劑、蛋白質、抗體、以及分析試劑盒產品。