蛋白質印跡手冊之一：膜的選擇

了解過Western印跡實驗得都知道PVDF膜和NC膜作為應用中最常用的兩種類型的膜，那大家該如何選擇？各有什么特點？其中PVDF膜市面上常見的也有三種。這三種膜有何不同，分別適合哪些應用呢？

Part 1：膜的選擇

蛋白印跡所使用的膜的類型可能影響下列因素：

? 蛋白質結合能力

? 是否需要用醇預濕

? 開展多次剝離（stripping）和再生檢測（reprobing）實驗的能力

? 蛋白質觀察

? 長期印跡保存

? 信噪比

聚偏二氟乙烯（PVDF）和硝酸纖維素是Western印跡應用中最常用的兩種類型的膜。

與硝酸纖維素膜相比，電轉到PVDF膜上有許多優點。PVDF膜可提供更好的蛋白質截留率、物理強度和廣泛的化學兼容性（Pluskal等，1986）。其中更高的機械強度和出色的耐化學性讓PVDF膜成為免疫檢測中各種染色應用和二次檢測的理想選擇。使用PVDF膜的另一個優點是，單塊凝膠上的平行重復泳道可用于各種應用中，如考馬斯藍染色，接著切割條帶進行N端測序，蛋白質水解/肽段分離/內部測序，以及免疫檢測（Kurien等，2003）。市售的硝酸纖維素膜的典型結合能力是80 – 100 μg/cm2，而PVDF膜的結合能力是100 – 200 μg/cm2。

在檢測血清中人免疫缺陷病毒（HIV）時直接比較PVDF和硝酸纖維素膜，結果表明，PVDF膜有著更好的總體HIV抗原截留率，并且有助于改善提高抗體對糖基化包膜抗原的檢測。硝酸纖維素膜和PVDF膜的特性比較詳見表1。

表1. PVDF和硝酸纖維素膜特性及應用的比較。

PVDF轉印膜

常見的三種PVDF膜：0.45 μm P膜、0.2 μm PSQ膜、0.45 μmFL膜

0.45 μm P膜是一種通用的基質，適用于一般的免疫印跡應用。

0.2 μm PSQ膜適用于蛋白質測序和低分子量蛋白的免疫印跡。它有著更高的蛋白質結合能力以及比0.45 μm膜更高的截留率。

0.45 μmFL膜是為熒光免疫檢測而開發的。它在多種激發和發射波長范圍內的熒光背景都極低。

以下提供各種PVDF轉印膜的性質，詳見表2。

表2. PVDF轉印膜的性質和應用。

看以上介紹大家可根據實驗需求來選擇所需要的膜~