細胞&類器官回收液：從水凝膠或動物源細胞外基質中回收細胞&類器官，僅需15min

VitroGel類器官回收溶液是一種即用型、非酶細胞回收溶液，用于快速高效地從VitroGel或基于動物的細胞外基質（ECM）中回收類器官或3D培養的細胞。VitroGel類器官回收溶液在室溫下穩定，并具有中性pH值?；厥盏募毎梢栽?D和3D培養中進行亞培養。VitroGel細胞回收溶液可以在水凝膠標本固定和染色制備之前或之后使用，以確保高質量的下游數據分析。VitroGel類器官回收溶液也可用于從2D細胞外基質涂層板中收獲細胞。VitroGel類器官回收溶液支持高恢復率和細胞活性，適用于細胞傳代、冷凍保存或隨后的生化分析中的完整類器官/細胞。

1、回收動物源ECM中的細胞/類器官(如Matrigel, Cultrex, and Geltrex)

方案一 動物源ECM培養的細胞/類器官的回收 

注意：對動物源ECM細胞/類器官回收之前，將VitroGel回收液冷卻至4℃以獲得z佳效果。

1.從動物源ECM培養板中吸除培養基。

2.向24孔板的每孔中加入1 mL預冷的VitroGel回收液(4°C預冷)。

3.將凝膠和溶液一起轉移到15 mL的離心管中。（可選:另加1 mL回收液洗滌培養板，并將其混合到離心管中。） 

4.輕輕上下吹吸5-10次，將離心管放在冰上或放在冰箱中2-5分鐘，使ECM分離。（可選:搖晃離心管2-5分鐘，而不是移液吹吸。） 

5.4°C,100 x g，離心3-5分鐘。 

6.除去上清。細胞應準備好傳代或儲存。（可選:將類器官分解成更小的碎片，將細胞重懸在培養基中，徹底移液并再次離心。）

注意：由于動物源ECM的蛋白質濃度不同，可能需要將細胞重新懸浮在額外的VitroGel回收液中(重復步驟4至6)，以完全去除ECM。 

方案二 從動物源ECM包被板中回收iPSC

1.從動物源ECM培養板中吸除培養基。 

2.在6孔板的每孔中加入2 mL PBS溶液，洗滌。 

3.在6孔板的每孔中加入1 mL的VitroGel細胞回收液。 

4.室溫孵育培養板3-5分鐘。（可選:將培養板放入冰箱2-5分鐘，加速ECM解離。） 

5.每孔加入1 mL培養基，將細胞懸液轉移到15 mL的離心管中。 

6.用1 mL培養基清洗兩遍，將培養液混合到離心管中。

7.在4℃，100 x g的條件下離心3-5分鐘，回收iPSC。  

2、VitroGel水凝膠系統中回收細胞/類器官示意圖

以24孔板為例，以下方案一和方案二的選擇取決于細胞和水凝膠的條件，如果水凝膠中的細胞直徑大于500 um，建議使用方案一; 如果使用的是高濃度水凝膠(1：0或1：1稀釋)或水凝膠中細胞的直徑小于500 um，則推薦使用方案二。 

方案一 使用移液管

1.將VitroGel回收液溫熱至37°C。 

2.將細胞從培養箱中取出，吸除覆蓋水凝膠頂部的培養基。用DPBS清洗水凝膠2次。 

3.向孔中加入1 mL溫熱的VitroGel回收液，并用10 mL移液管輕輕上下吹吸，使水凝膠變成小塊，加速水凝膠的溶解。

4.向15 mL離心管中加入5 mL預熱的VitroGel回收液，并將水凝膠轉移到管中。（可選:用1 mL溫熱的VitroGel回收液沖洗培養孔，并將溶液混合到離心管中） 

5.使用10 mL的移液管輕輕上下吹吸2-5次，然后將離心管水浴2-3分鐘。重復此循環2-3次。(根據凝膠強度和細胞類型，優化移液次數和重復次數) 

6.室溫下100 × g離心3-5分鐘，收集細胞(根據不同細胞類型，優化離心速度和時間)。（可選:如果細胞顆粒頂部仍有一些水凝膠，用5 mL溫熱的VitroGel回收液重懸細胞，再重復步驟4至6。）  

方案二 使用實驗刮刀

1.將VitroGel回收液溫熱至37°C。 

2.將細胞從培養箱中取出，吸除覆蓋水凝膠頂部的培養基。用DPBS清洗水凝膠2次。 

3.向孔中加入1 mL溫熱的VitroGel回收液，用刮刀將水凝膠從孔板上分離。 

4.向15 mL離心管中加入5 mL預熱的VitroGel回收液，并將水凝膠轉移到管中。（可選:用1 mL溫熱的VitroGel回收液沖洗培養孔，并將溶液混合到離心管中） 

5.搖動離心管20次，然后將離心管水浴2-3分鐘。重復這個循環3-5次。(根據凝膠強度和細胞類型，優化搖擺時間和重復次數)。 

6.室溫下100 x g離心3-5分鐘，收集細胞(根據不同的細胞類型，優化離心機的速度和時間)。（可選:如果細胞顆粒頂部仍有一些水凝膠，用5 mL溫熱的VitroGel回收液重懸細胞，再次重復步驟5和6。）  案例

使用VitroGel 類器官回收溶液（貨號MS04）通過兩種不同的方法從Matrigel中回收類器官。 

方法 1：用VitroGel類器官回收液重懸類器官，移液槍將類器官吹打成小片段進行傳代培養/擴增。

方法 2：在不使用移液槍的情況下，搖動裝有類器官和VitroGel類器官回收液混合物的試管，以獲得完整的類器官。 

在這兩種情況下，VitroGel類器官回收液都保存在4℃中，以在使用前保持低溫。在離心之前，將類器官/基質膠和VitroGel回收液混合物在室溫下孵育2分鐘。第0天的圖像顯示了用兩種不同方法回收后的類器官的形態。

使用VitroGel類器官回收液從2D Matrigel涂層板回收iPSC

VitroGel類器官回收液可用于從2D Matrigel涂層板回收iPSC細胞。使用前將溶液預熱至室溫。A) 細胞從Matrigel涂層板上脫離的形態。（加入VitroGel類器官回收液后3分鐘），B) 收獲細胞后的孔板圖像。（顯示所有細胞已從Matrigel涂層板上移除），C) 重新接種到新Matrigel涂層板后的細胞形態（第3天）。  

參考文獻

1、De Donato, M., Babini, G., Mozzetti, S., Buttarelli, M., Ciucci, A., Arduini, G., De Rosa, M. C., Scambia, G., & Gallo, D. (2020). KLF7: a new candidate biomarker and therapeutic target for high-grade serous ovarian cancer. Journal of Experimental & Clinical Cancer Research, 39(1). https://doi.org/10.1186/s13046-020-01775-9 

2、Lan, T., Guo, J., Bai, X., Huang, Z., Wei, Z., Du, G., Yan, G., Weng, L., & Yi, X. (2020). RGD-modified injectable hydrogel maintains islet beta-cell survival and function. Journal of Applied Biomaterials & Functional Materials, 18, 228080002096347. https://doi.org/10.1177/2280800020963473 

3、Powell K. Adding depth to cell culture. Science, 356(6333), 96–98. https://doi.org/10.1126/science.356.6333.96