多聚HRP，低豐度蛋白信號放大器

曾經有小伙伴反應，我的目的蛋白做WB沒有條帶或者條帶特別淡，做IHC也沒有陽性結果，嘗試了不同稀釋比的抗原，一抗，二抗，更換了不同廠家生產的抗體，結果還是不好，內參和其他蛋白都有正常的結果，到底是什么原因了？最后我們提醒客戶，是不是目的蛋白本身的表達量就非常低，增加抗體濃度的作用也是非常有限的，最后客戶又看到相關文獻，報道該目的蛋白在正常樣本種表達量確實特別低，都到皮克級別了，難怪常規的WB和IHC檢測結果不好，于是我們給客戶推薦了多聚HRP標記的二抗，成功檢測到了陽性結果。

Poly HRP是一種增強信號的酶標記物，由共價辣根過氧化物酶（HRP）聚合物組成。目的蛋白的信號通過抗體傳遞給Poly HRP上攜帶的大量HRP分子，然后HRP分子作用于底物釋放信號，使得目的蛋白檢測信號得到放大，這些信號放大程度與HRP聚合范圍成正比，從而可以利用多聚HRP在免疫分析中檢測到低豐度蛋白（pg級別范圍）。

HRP聚合體以及SA－PolyHRP40示意圖

注：

灰色的是SA（鏈霉親和素）

褐色的是HRP

鏈霉親和素-poly HRP綴合物（SA－PolyHRP）由五個相同的HRP同聚物組成，同時與多個鏈霉親和素分子共價偶聯。目前生產過程中使用了三種不同的同聚物，它們分別是PolyHRP20、PolyHRP40和PolyHRP80。鏈霉親和素-PolyHRP80比鏈霉親和素-PolyHRP40靈敏度更高，鏈霉親和素-PolyHRP40比鏈霉親和素-PolyHRP20靈敏度更高。

不同尺寸HRP多聚體示意圖

用鏈霉親和素-PolyHRP技術檢測技術標記非常簡單，可以將它們結合到現有的測定系統中，現有的步驟，孵育間隔等幾乎不需要改變。所需試劑基本上與使用標準鏈霉親和素-HRP進行的常規ELISA相同。類似地，PolyHRP幾乎可用于任何以HRP底物開發的檢測系統（比色法、熒光法、包括化學發光），這也意味著與現有的ELISA和IHC儀器完全兼容。PolyHRP檢測可能有利的其他分析方法包括高靈敏度DNA/RNA雜交分析和配體受體分析。

PolyHRP的優勢：

靈敏度高：polyHRP可以檢測極低的目標(皮克-飛克范圍)，信噪比高；

靈活：兼容的顯色，熒光和化學發光底物

高效：試劑純度高，不含未結合的分子，具有高比活度和低背景

穩定：即用型液體試劑可保存在4℃，

性價比高：每次測定所需的偶聯物遠遠少于常規測定

用途多樣：兼容ELISA, Western blotting，免疫組化等

易于使用：可直接替代免疫分析和其他檢測方法

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