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體外受精(In Vitro Fertilization)是指哺乳動物的精子和卵子在體外人工控制的環境中完成受精過程的技術,英文簡稱為IVF。由于它與胚胎移植技術(ET)密不可分,又簡稱為IVF-ET。在生物學中,把體外受精胚胎移植到母體后獲得的動物稱試管動物(test-tube animal)。這項技術成功于20世紀50年代,在最近20年發展迅速,現已日趨成熟而成為一項重要而常規的動物繁殖生物技術。

體外受精技術對動物生殖機理研究、畜牧生產、醫學和瀕危動物保護等具有重要意義。如用小鼠、大鼠或家兔等作實驗材料,體外受精技術可用于研究哺乳動物配子發生、受精和胚胎早期發育機理。在家畜品種改良中,體外受精技術為胚胎生產提供了廉價而高效的手段,對充分利用優良品種資源,縮短家畜繁殖周期,加快品種改良速度等有重要價值。在人類,IVF-ET技術是治療某些不孕癥和克服性連鎖病的重要措施之一。體外受精技術還是哺乳動物胚胎移植、克隆、轉基因和性別控制等現代生物技術不可缺少的組成部分。
體外受精過程需要從體內取出成熟的卵母細胞和精子,在離體條件下培養一段時間,然后進行人工授精,受精卵需要在體外培養發育成胚胎才能進行后續的應用(例如胚胎移植等),這些過程中由于脫離了母體的條件,需要用到各類的培養液模擬體內的生理環境,今天就來給大家介紹一下體外受精過程中常用的一些培養基:
卵母細胞的培養:
卵母細胞體外成熟是一個復雜的過程,細胞質和細胞核需要發生一系列聯系性的結構和分子方面的變化,才能完成胞核和胞質的成熟。大量研究證明哺乳動物卵母細胞體外成熟所采用的培養液不僅對卵母細胞的成熟,而且對受精和隨后的胚胎發育均有著顯著的影響。目前對牛卵母細胞體外成熟的研究主要集中在以TCM199為基礎培養液,再添加激素,血清,卵泡液, 生長因子及顆粒細胞等成分來模擬卵母細胞體內成熟的環境以及各種成分間的相互作用以期達到與體內相當的成熟效果。
常用的卵母細胞成熟培養液配方:
基礎培養液為TCM-199,添加10%FCS,25mM Hepes、0.55mg/ml丙酮酸鈉及100IU青、鏈霉素;
精子的獲能及卵子受精:
精子獲能:哺乳動物精子的獲能方法有培養和化學誘導兩種方法。牛、羊的精子常用化學藥物誘導獲能,誘導獲能的藥物常用肝素和鈣離子載體。受精:即獲能精子與成熟卵子的共培養,除鈣離子載體誘導獲能外,精子和卵子一般在獲能液中完成受精過程。受精培養時間與獲能方法有關。在B2液中一般為6-8小時而用TALP液作受精液時可培養18~24h。精子和卵子常在小滴中共培養,受精時精子密度為1~9×106/ml,每10微升精液中放人1~2枚卵子,小滴體積一般為50~200微升。
精子細胞培養液配方推薦:
精子洗滌液:BO/TALP基礎液+6mg/ml BSA(FractⅤ)+5mM咖啡因
精子獲能液:BO/TALP基礎液+6mg/ml BSA(FractⅤ)+5mM咖啡因+60ug/ml肝素
胚胎體外培養:
胚胎培養液分為復雜的和化學成分明確的培養液兩大類。復雜培養液中的成分很多,除無機和有機鹽外,還添加維生素、氨基酸、核苷酸和嘌呤等營養成分和血清。常用的胚胎培養基有M199、KSOM和F10,用它們培養胚胎時,可以采用體細胞共培養體系,即體細胞與胚胎在微滴中共同培養,利用體細胞生長過程中分泌的有益因子,促進胚胎發育,克服發育阻斷。
常見胚胎體外培養液配方推薦:
M199+10%FCS+2.2mg/100ml丙酮酸鈉+100IU/ml雙抗
mSOF+10%FCS+2.2mg/100ml丙酮酸鈉+100IU/ml雙抗
產品推薦:
| 產品名稱 | 貨號 | 規格 |
| HEPES-TALP培養液 | IVL01 | 500ml、6*500ml |
| IVF-TALP培養液(TALP基礎培養液) | IVL02 | 100ml、6*100ml |
| sperm-TALP培養液 | IVL03 | 100ml、6*100ml |
| KSOM+AA培養基 | IVL04 | 100ml、6*100ml |
| SOF(合成輸卵管液)培養基 | IVL05 | 100ml、6*100ml |
| KSOM+AA(無蛋氨酸) | IVL08 | 100ml、6*100ml |
| M199 | MDP02、MDP04 | 10LT,50LT,10*1LT |
上述培養基成分表:
| 組分 (單位:mg/L) | IVL01 | IVL02 | IVL03 | IVL04 | IVL05 | IVL08 |
| Glycine(甘氨酸) | 3.75 | 3.75 | ||||
| L-Alanine(丙氨酸) | 4.45 | 4.45 | ||||
| L-Arginine,Hydrochloride (精氨酸) | 63.20 | 63.20 | ||||
| L-Asparagine,Monohydrate (天冬酰胺) | 7.50 | 7.50 | ||||
| L-AsparticAcid(天冬氨酸) | 6.66 | 6.66 | ||||
| L-Cystine(胱氨酸) | 12.02 | 12.02 | ||||
| L-Glutamine(谷氨酰胺) | 146.15 | 29.23 | 146.15 | |||
| L-Histidine,Anhydrous(組氨酸) | 20.96 | 20.96 | ||||
| L-Isoleucine(異亮氨酸) | 26.23 | 26.23 | ||||
| L-Leucine(亮氨酸) | 26.24 | 26.24 | ||||
| L-Lysine,Hydrochloride(賴氨酸) | 36.52 | 36.52 | ||||
| L-Methionine(甲硫氨酸) | 7.46 | |||||
| L-Phenylalanine(苯丙氨酸) | 16.52 | 16.52 | ||||
| L-Proline(脯氨酸) | 5.76 | 5.76 | ||||
| L-Serine(絲氨酸) | 5.26 | 5.26 | ||||
| L-Tryptophan(色氨酸) | 5.11 | 5.11 | ||||
| L-Tyrosine(酪氨酸) | 18.12 | 18.12 | ||||
| L-Valine(纈氨酸) | 23.42 | 23.42 | ||||
| CalciumChloride,Anhydrous (氯化鈣、無水) | 220.2 | 222.2 | ||||
| CalciumChloride,Dihydrate (氯化鈣、二水合物) | 310 | 250.0 | 261.68 | 250 | ||
| EDTA,DisodiumSalt,Dihydrate (EDTA二鈉二水合物) | 3.72 | 3.72 | ||||
| MagnesiumChloride,Hexahydrate (六水合氯化鎂) | 83.9 | 101.65 | 81.32 | |||
| MagnesiumSulfate,Heptahydrate (七水硫酸鎂) | 49.3 | 372.18 | 49.3 | |||
| PotassiumChloride (氯化鉀) | 238.72 | 238.4 | 230.95 | 186.38 | 533.78 | 186.38 |
| PotassiumPhosphate, Monobasic,Anhydrous (磷酸二氫鉀) | 47.99 | 161.95 | 47.99 | |||
| SodiumBicarbonate(碳酸氫鈉) | 168 | 2100 | 2100 | 2100.25 | 2100.25 | 2100.25 |
| SodiumChloride(氯化鈉) | 6669 | 6669 | 5850 | 5551.79 | 6293.99 | 5551.8 |
| SodiumPhosphate,Monobasic, Monohydrate(磷酸二氫鈉) | 48 | 55.2 | 40.02 | |||
| BovineSerumAlbumin,FractionV (BSA) | 1000 | 1000 | ||||
| CitricAcid,Trisodium (TrisodiumCitrate),Dihydrate(檸檬酸) | 99.99 | |||||
| D-Glucose,Anhydrous (葡萄糖) | 36.03 | 36.03 | ||||
| HEPES | 2384 | 2383 | ||||
| PhenolRed,SodiumSalt (酚紅) | 10.0 | |||||
| PyruvicAcid,SodiumSalt (丙酮酸鈉) | 22 | 44.02 | 22.0 | |||
| SodiumL-Lactatesolution(60%) (L-乳酸鈉) | 1.416 | 1.416 | 3.6800 | 1.416 | 0.757 | 1.416 |
| Myo-Inositol(肌醇) | 499.04 |
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