IF/IHC背景太高？正常驢血清來助力

       想必各位實驗達人對于免疫組化（IHC）和免疫熒光（IF）應該都比較熟悉了，在做免疫組化（IHC）或是免疫熒光（IF）實驗過程中，高背景是我們經常遇見的問題，有的時候盡管我們進行了封閉操作，背景依舊居高不下。想當年我也曾經就被免疫熒光背景問題帶來的恐懼深深支配過，別人做的免疫熒光的結果是這樣的：

      我按照同樣的步驟做的免疫熒光，只是沒有染色DAPI，結果是這樣的：

      我的細胞你在哪？（是不是上帝在我眼前遮住了臉，忘了掀開）

      直到某天我在艾美捷官網上瀏覽到關于IF實驗產生背景的原因及降低背景的常用方法：

       IF降低背景：

       高背景是免疫熒光常見的問題，解決此問題可以用二抗來源的正常血清代替 BSA 做封閉液，降低抗體濃度，增加洗滌次數，洗滌至少三次，每次五分鐘，推薦洗滌液為 PBS+0.05% Tween。

      我們實驗室之前大多數都是使用BSA進行封閉，用正常血清代替BSA進行封閉倒是第一次聽說，血清真的有如此奇效，我迫不及待的趕緊去嘗試了一番，熒光背景確實顯著降低了。

       什么是封閉血清（Blocking Serum=Normal Serum）？

      封閉血清是將飼養的非免疫的一切正常小動物取血，隨后不用抗凝劑，凝血機制，血團收攏，溶解的淺黃色液體。歷經獨特處理工藝后的血清，非常適在各種免疫學實驗中用以封閉解決， 例如：IHC、IF/ICC、ELISA等。

       血清作為封閉劑的原理：

      強烈建議在PBS中稀釋至5％（v / v）的正常血清作為封閉劑，以減少免疫反應中非特異性，保守序列和/或Fc受體結合的背景。用稀釋的正常血清與標記抗體來自同一宿主，可獲得最佳結果，作為添加一級抗體之前的單獨孵育步驟。

       用血清進行封閉效果好嗎？

      封閉血清適用于免疫組化或者免疫熒光實驗中樣本的封閉，可以封閉待檢樣本中與蛋白質非特異性結合的位點，另外還可以封閉樣品中內源性的Fc片段結合位點，阻斷抗體與樣品中的Fc受體結合，從而降低背景，減少假陽性。對于適用多抗的實驗，選擇二抗種屬來源的正常血清是封閉處理的金標準。

       封閉血清如何使用？

      推薦用PBS將封閉血清原液稀釋5-20倍，配成5%-20%的工作液，直接滴加在組織切片或者細胞涂片上，37℃度孵育10-30min（或者室溫1h），清除血清，不用洗滌，滴加適當比例稀釋的一抗工作液，37℃孵育1-2h或4℃過夜。

通過上面對封閉血清的介紹，您是不是有一種想立刻動手試一試的沖動呢? 心動不如行動，快來動手試一試吧，看看小艾給您介紹的降低背景小技巧對您的實驗有沒有幫助，相信您也可以做出漂亮的圖片!

       封閉血清推薦：

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