鳥苷酸交換因子（GEF）活性檢測工具，實驗省心又省力

小G蛋白的共同特點是，當結合了GTP時即成為活化形式，這時可作用于下游分子使之活化，而當GTP水解成為GDP時（自身為GTP酶）則恢復到非活化狀態（分子開關），正常情況下，在細胞中，小G蛋白會在跟GDP結合的“關閉狀態”和 GTP 結合的“開啟狀態”之間循環，這種循環過程主要由細胞內的小G蛋白調節因子來控制，胞內小G蛋白調節因子主要有兩類：一類是可以增強小G蛋白的活性的鳥苷酸交換因子（guanine nucleotide exchange factor, GEF），另一類是可以降低小G蛋白活性的GTP酶活化蛋白（GTPase activating protein, GAP）。

今天我們就主要來聊一聊小G蛋白活性增強劑——鳥苷酸交換因子（GEF），GEF 是通過催化其目標 GTPase上的核苷酸交換來發揮作用，GEF與核苷酸結合的 GTPase 結合，這會導致結合的核苷酸被釋放，從而產生不含核苷酸的GEF-GTPase 反應中間體。這種不含核苷酸的復合物隨后將結合新的核苷酸，然后GEF再從GTPase 中釋放出來。

由于GEFs對GDP-GTPases的親和力高于對相應GTP-GTPases的親和力，在正常細胞中GTP和GDP比率約為10:1，GEFs將推動從GDP-GTPases到GTP-GTPases的轉換。

在這里小艾給大家帶來一款獨一無二的GEF活性檢測試劑盒，這是一款基于熒光法的檢測GTP酶上的核苷酸轉換的試劑盒，可適用于常規的96孔格式或高通量384孔格式。

該試劑盒包含檢測所需的所有試劑：

1.Exchange Buffer

2.His標簽 Cdc42蛋白

3.His標簽 Rac1 蛋白

4.His標簽 RhoA 蛋白

5.His標簽 hDbs 蛋白（作為 Cdc42 和 RhoA 的GEF的陽性對照 ）

6.黑色384孔板

7.黑色96孔板

檢測原理：該試劑盒是通過檢測熒光核苷酸類似物 N-甲基鄰氨基苯甲酰-GTP（mant-GTP）對 GTPase 的結合情況來檢測GEF的活性的。一旦mant-GTP與 GTPase 結合， mant-GTP的熒光強度（Ex：360 nm，Em：440 nm）顯著增加，通過檢測游離的mant-GTP和GTPase 結合的 mant-GTP 之間的熒光值差異，即可檢測樣本中GEF的活性。

本試劑盒的主要用途和應用:

1. 測定未知GEFs活性；

2. 小GTPases及其相關GEFs的生化特性表征；

3. 研究不同輔助因子或蛋白結構域對GEF活性的調控；

4. 篩選GEFs或GTPases突變蛋白的活性和底物特異性；

5. HTS(高通量篩選)篩選鑒定GEF抑制劑。

檢測結果展示：

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用BK100發表的部分引文賞析：

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