FITC熒光二抗？—新型DyLight 488綠色熒光

FITC（Fluorescein Isothiocyanate，異硫氰酸熒光素）是一種綠色熒光團，在免疫學實驗里，經常被用于熒光團標記到相應的檢測分子，如抗體上。FITC的純品為黃色或橙黃色結晶粉末，易溶于水和酒精溶劑。FITC分子量為389.4，最大吸收光波長為 490～495nm，最大發射光波長為520～530nm，呈現明亮的黃綠色熒光。FITC在冷暗干燥處可保存多年，是目前應用最廣泛的熒光素。由于FITC是小分子化合物，每一個抗體可標記幾個FITC分子，IgM通常用小分子的熒光素標記，如FITC、Cy3/5、Texas Red等。

我們知道，FITC的綠色熒光強度肉眼觀察已經很亮了，但是從上面的圖可見，與Cy2相比還是偏弱，而DyLight 488則更勝一籌。DyLight是一種新型的熒光分子，與傳統的熒光團如FITC、Rhodamine、Texas Red等相比，具有更強的熒光強度、更高的光學穩定性以及特異性等。同時，DyLight種類齊全，如Dylight 405就是藍色熒光，Dylight 488是綠色熒光，可完全替代FITC；完全替代Cy3和Rhodamin的Dylight 549；替代Texas Red的Dylight 594；Dylight 633和Dylight 649則是更強的紅色熒光；另外，Dylight還有適配Odyssey系統的近紅外和遠紅外二抗，分別是Dylight 680和DyLight 800。

FITC本身性質穩定，能與蛋白質結合，是檢測組織細胞內蛋白質最常用的熒光探針。它還能標記抗體，可用于免疫組織化學單染或多重染色。FITC熒光二抗主要優點是人眼對黃綠色較為敏感，通常切片標本中的綠色熒光少于紅色。缺點是在光照下 易淬滅，易受自發熒光影響。實際上，FITC的最大缺點是淬滅快，因此要和抗淬滅劑一起使用。DyLight 488則完全不一樣，如右圖所示，不同熒光團在含有抗淬滅劑（90%甘油的PBS）里的熒光淬滅情況，由圖可見。FITC的淬滅最快，Cy2其次，而Dylight 488和Alexa 488都具有很好的光穩定性。因此DyLigt非常適合熒光拍照。那么Dylight到底是一種什么樣的熒光團？不管在結構以及功能和應用上，Dylight都是一種新的熒光團，與傳統的熒光團相比，其分子量相對較小， 因此一個大分子上可以標記更多的Dylight，同時單個的Dylight熒光團，其熒光強度更強，特異性更好；Dylight對光更穩定，這意味著其具 有更高的抗淬滅性，不像FITC因為快速發生淬滅而無法及時捕捉到熒光圖像。

可能還需要考慮的一個問題是價格的問題，其實Dylight的熒光二抗與常規熒光二抗相比，具有更高的性價比，一般來說，Dylight的價格比常規二抗 只高50%左右，但是Dylight的效價通常是常規熒光二抗的2-4倍左右，因此就最終的性價比，Dylight更勝一籌。以2011年報價舉例來說，FITC標記的山羊抗小鼠IgG二抗（貨號為A22110），100μl和500μl報價分別是￥160和￥640；而相應的 Dylight 488標記的山羊抗小鼠IgG二抗（貨號為A23210），100μl和500μl報價分別是￥240和￥960，但是在具體使用時，比如免疫熒光實 驗，其推薦稀釋比率分別為1:100和1:400，即100μl和500μl的FITC標記山羊抗小鼠IgG二抗（貨號為A22110）最終使用液是 10ml和50ml，而100μl和500μl的Dylight 488標記山羊抗小鼠IgG二抗（貨號為A23210）最終使用液是40ml和200ml，可見，即使不考慮Dylight更高的熒光強度、更好的光學 穩定性和特異性，但就價格來說，Dylight熒光二抗也具有更高的性價比。下圖為原裝進口DyLight 488標記，針對不同種屬的二抗產品，Abbkine均提供現貨包裝：

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