Fab-ZAP human (IT-51)，助力ADC抗體&雙特異性抗體藥物研發

ADC藥物研發是目前醫藥領域的熱門研究方向之一，ADC（Antibody-drug conjugates）即抗體藥物結合物，是一種將抗體與化療藥物結合的新型藥物。它利用抗體的特異性靶向腫瘤細胞，將化療藥物精確送達腫瘤細胞內部，從而減少對正常細胞的損害，提高治療效果。

在ADC藥物研發中，抗體藥物內化（internalization）是一個至關重要的環節?？贵w藥物內化指的是抗體與靶向腫瘤細胞表面抗原結合后，通過內吞作用將抗體藥物與腫瘤細胞一起內部化。這一過程對于ADC藥物的療效和安全性至關重要。   

艾美捷為您推薦，Fab-ZAP human（#IT-51）是山羊抗人一價抗體和核糖體滅活蛋白saporin的化學偶聯物。它使用人一抗來靶向和消除細胞。該二級偶聯物被廣泛用于評估一抗內化的潛力。

科研與工業，實用案例：

1.Fab-ZAP human（#IT-51）專業的抗體內化工具，助力雙特異性抗體研發

我們構建了一種雙特異性抗體，稱為bsAb CD47xEGFR-IgG1，以EGFR為靶點，阻斷了癌細胞表面CD47的表達。bsAb CD47xEGFR-IgG1選擇性地誘導吞噬EGFRpos/CD47pos癌細胞，并賦予中性粒細胞殺死這些癌細胞的能力，這是一種破壞靶細胞膜的ADCC的替代形式。  

【具體實驗方法】評估bsAb CD47xEGFR-IgG1的內化

EGFRpos/CD47pos NCI-H292細胞與bsAb CD47xEGFR-IgG1或對照bsAb（2 μg/ml）以及抗人Fc saporin-6毒素標記的Fab（Fab-ZAP，IT-51，Advanced Targeting Systems）一起，評估了抗體/抗原復合物的內化。72小時后，利用流式細胞術使用annexinV/PI染色評估了凋亡癌細胞的死亡。通過流式細胞術，使用一系列固體癌細胞類型評估了bsAb CD47xEGFR-IgG1內化EGFR和CD47的能力。簡而言之，癌細胞在37°C條件下用bsAb CD47xEGFR-IgG1（1 μg/ml）或適當的對照處理24小時，隨后使用抗EGFR mAb 528和抗CD47 mAb 2D3評估殘留的EGFR和CD47細胞表面表達。值得注意的是，mAb 528和mAb 2D3分別結合EGFR和CD47上不重疊的表位，不干擾bsAb CD47xEGFR-IgG1對EGFR和/或CD47的結合。

Fig.1 在使用Fab-ZAP (IT-51)時，通過指定的抗體內化EGFR和/或CD47，使用山羊抗人單價抗體和沙門酸菌素的化學結合物，測量NCI-H292細胞的凋亡，在72小時后進行測量。通過流式細胞術使用細胞凋亡素V染色測量凋亡.  

2.Fab-ZAP human（#IT-51）專業的抗體內化工具，助力三優生物ADCs平臺

2.1 Fab-zap，檢測Sacituzumab抗體被hu-TROP2-HEK293內吞

Fig.2 用Fab-zap試劑和抗體偶聯，抗體引導ZAP復合物到達目的細胞，隨后與目的細胞結合并內化。ZAP復合物進入細胞質后，連接子（Linker）被酶解，釋放Saporin殺傷細胞。抗體復合物和細胞共孵育48 h后，通過檢測抗體復合物對細胞的殺傷來計算抗體的內吞率，48 h后，Sacituzumab被hu-TROP2-HEK293內吞比率隨抗體的濃度加大而增大，在抗體濃度為0.4 nM時內吞率達到70%。[數據來自，三優生物對外公開數據]  

2.2 Fab-zap，檢測Sacituzumab抗體被NCI-H292內吞

Fig.3 抗體復合物和NCI-H29細胞共孵育48 h后，通過檢測抗體復合物對細胞的殺傷來計算抗體的內吞率，48 h后，Sacituzumab被NCI-H292細胞內吞比率隨抗體的濃度加大而增大，在抗體濃度為0.4 nM時內吞率達到70%。[數據來自，三優生物對外公開數據]  

2.3 Fab-zap，檢測99961.1被hu-ROR1-HEK293內吞

Fig.4 抗體復合物和hu-ROR1-HEK293細胞共孵育48 h后，通過檢測抗體復合物對細胞的殺傷來計算抗體的內吞率，48 h后，99961.1被hu-ROR1-HEK293細胞內吞比率隨抗體的濃度加大而增大，在抗體濃度為0.4 nM時內吞率達到70%。[數據來自，三優生物對外公開數據]  

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