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前情回顧:食品真菌毒素檢測的那些事
Elisa生物檢測是一種敏感度高,同時特異性強,重復性好的實驗檢測方法,由于其試劑穩定、易保存,操作簡便,結果判斷較客觀等因素,已廣泛應用在免疫學檢驗的各領域中。
目前市面上的Elisa試劑盒檢測原理主要有以下四種:直接法,間接法,夾心法,競爭法。

四種Elisa檢測方法由于其檢測原理各有優劣:
| 優點 | 缺點 | |
| 直接法 | 1.操作簡便 2.消除了二抗交叉反應 | 1.一抗由于添加標簽免疫活性降低 2.標記一抗耗時且昂貴 3.沒有產生信號放大 |
| 間接法 | 1. 一抗的最大免疫反應性得以保留 2. 高靈敏度,信號放大 | 1. 二級抗體可能發生交叉反應,產生非特異性信號 2. 需要額外的孵育步驟 |
| 夾心法 | 1.特異性,靈敏度高 2.適合復雜的樣本 | 1.檢測時間,反應時間增加 2.步驟繁瑣 |
| 競爭法 | 1. 通過觀察預期信號輸出中的干擾來測量樣本中抗原(或抗體)的濃度。 2. 最常用于分析物較小,不能同時跟兩種不同的抗體結合。 | 1.計算不太直觀 2.總體敏感性和特異性較低。 |
通常我們在購買我們所需要的Elisa試劑盒時主要會從以下幾個方面進行選擇:
Elisa試劑盒選擇原則:
| 指標 | 選項 |
| 樣本類型 | 人,小鼠,大鼠 |
| 檢測指標的類別 | •多表位的大蛋白:夾心ELISA •小分子:競爭ELISA |
| 檢測需求 | 定性或定量 |
| 靈敏度 | 低濃度的物質需選擇高靈敏度檢測方式 |
| 樣本體積 | 珍貴的樣本用少量的體積 |
| 回收率和線性 | •靈敏度 •動態范圍 •標準曲線 |
| 檢測系統 | 比色法,熒光法,發光法 |
| 其他優勢 | 協議簡單,操作方便,實驗時間短 |
我們購買的Elisa試劑盒質量到底怎樣?檢測結果的可信度高不高?
Elisa試劑盒評價標準:
① 準確性:標準品線性回歸與預期濃度相關系數R值,應大于等于0.9900。
② 靈敏度:反應試劑盒的最低檢測濃度
③ 特異性:不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
④ 重復性:板內、板間變異系數
⑤ 回收率:判斷實驗的準確性和特異性
Elisa試劑盒的標準曲線:
標曲R值是幾個9才合格?
實驗室應按檢測標準(方法)的要求使用標準溶液或標準物質建立標準曲線。所用標準溶液或標準物質應覆蓋被測樣品的濃度范圍。檢測標準(方法)如無具體的要求,至少使用5個標樣(除空白外)建立線性標準曲線,每個點重復測定1-3次,對于篩選方法,線性回歸方程的相關系數不應低于0.98,對于確證方法,相關系數不應低于0.99。
其實,大于0.99是判斷是否為線性相關的一個標準,實際應用中線性大于0.999才是比較理想的。線性在0.99到0.999之間的監測結果只用接近最高濃度一半(中間濃度)的位置才比較準確,如果線性大于0.999的話,在整個線性范圍內都會有一個比較滿意的結果。
如果檢測的線性不好,可以減少標準的覆蓋范圍,將標準的濃度調整到待測樣品濃度附近,這樣結果也是非常準確的。例如,樣品的濃度約20ppb,但在0~50ppb范圍建立標準曲線,但線性非常不理想,這時可以將標準范圍調整到15~25ppb之間,作五個標準。
在這里,我們給大家帶來美國著名的生物檢測工具供應商Biovision開發了一系列的我們準確性高,靈敏度高,特異性好,重復性好,可以檢測檢測各類食品,飼料,組織及生物液體中真菌毒素、抗生素、食品添加劑以及其他細菌蛋白的ELISA試劑盒:
1.抗生素類:
檢測食品中抗生素的殘留
樣本類型:組織、血清、牛奶、雞蛋和其他生物樣本
| 指標 | 貨號 | 靈敏度 | 樣本 |
| 氨芐青霉素 | E4350 | 2.5 ng/ml | 血清,尿液,牛奶,組織 |
| 氯霉素 | K4230 | 0.025 ng/ml | 組織,牛奶,蜂蜜,記蛋 |
| 慶大霉素(血清/尿液) | K4315 | 0.3 ng/ml | 血清,尿液,牛奶,組織 |
| 慶大霉素 | K4206 | 0.3 ng/ml | 牛奶,組織 |
| 異煙肼 | K4765 | 0.1μg/ml | 血清 |
| 卡那霉素 | K4210 | 0.5 ng/ml | 組織,牛奶,奶粉 |
| 喹諾酮 | E4530 | 0.12 ng/ml | 血清,尿液,牛奶 |
| 鏈霉素 | E4272 | 0.1 ng/ml | 組織,蜂蜜,牛奶,奶粉 |
| 四環素 | E4273 | 0.05 ng/ml | 組織,蜂蜜,雞蛋 |
| 萬古霉素 | E4605 | 12.8 ng/ml | 血清,尿液 |
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| 以 慶大霉素 (serum/urine) ELISA Kit(K4315)為例 |
2.真菌毒素:
真菌毒素是真菌產生的低分子量次級代謝產物
樣品類型:玉米、谷物、花生、大米、大豆等。
| 指標 | 貨號 | 靈敏度 | 樣本 |
| 赭曲霉毒素A(OTA) | E4746 | 0.1 ppb | 飼料、谷物 |
| 總黃曲霉毒素 | E4747 | 0.02 ppb | 酒、醬油、醋、谷物、花生、 配方飼料、食用油 |
| T-2毒素 | E4748 | 0.05 ppb | 玉米、大米、豆類、花生、燕麥、飼料 |
| 伏馬菌素B1 | E4749 | 0.5 ppb | 谷物、花生、飼料 |
| 脫氧雪腐鐮刀菌烯醇 | E4750 | 3 ppb | 大米、小米、面粉和其他作物/飼料 |
| 黃曲霉毒素M1 | E4566 | 0.02 ppb | 牛奶、奶粉 |
| 黃曲霉毒素B1(AFB1) | K4208 | 0.05 ppb | 食用油、大米、花生、玉米 |
| 玉米赤霉烯酮(ZEN) | E4276 | 0.3 ppb | 谷類及復合飼料 |
3.食品添加劑:
食品受到生物和環境污染物的污染發生在生產和加工的幾個階段
樣品類型:牛奶、肉類、玉米、谷物、花生、大米、大豆,等。
| 指標 | 貨號 | 靈敏度 | 樣本 |
| 沙丁胺醇 | K4209 | 0.1 ppb | 豬尿、組織、飼料 |
| 磺胺單甲氧嘧啶 | E4774 | 0.05 ppb | 組織、血清、尿液、蜂蜜、牛奶 |
| 磺胺甲氧基二嗪 | E4775 | 0.5 ppb | 組織,血清,尿液,蜂蜜,牛奶 |
| 呋喃妥因(AHD) | E4275 | 0.05 ppb | 奶粉,牛奶,紙巾,雞蛋,肝臟,蜂蜜,魚,蝦 |
| 磺胺喹惡啉 | E4773 | 0.05 ppb | 組織,血清,尿液,蜂蜜,牛奶,飼料 |
4.宿主細胞蛋白:
表達蛋白經過幾個純化步驟后,宿主細胞蛋白仍然可以以較高濃度存在,甚至會與原料藥一起純化和濃縮
樣品類型:細胞裂解液、其他生物液
| 指標 | 貨號 | 檢測范圍 | 樣本 |
| CHO 宿主細胞蛋白 | E4537 | 0.1-100ng/ml | 細胞裂解液,其他生物液體 |
| 大腸桿菌蛋白 | E4451 | 1.5-160ng/ml | 血清、血漿、尿液、細胞培養樣品、生物液體 |
| BSA | E4466 | 6.25-400ng/ml | 人血清,血漿,細胞培養上清液,組織勻漿和其他生物液體 |
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| QuickDetectTM BSA ELISA Kit(E4466) |
5.其他毒素:
雙酚A和三聚氰胺
| 指標 | 貨號 | 檢測范圍 | 樣本 |
| 雙酚A(BPA) | E4722 | 0.4-30 ppb | 細胞裂解液,其他生物液體 |
| 三聚氰胺 | E4274 | 2-162 ppb | 奶粉、牛奶、紙巾、飼料、雞蛋、血清 |
|
| 雙酚A ELISA Kit(E4722) |
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