EdU細胞增殖檢測，試劑盒及全套原料打包放送

細胞增殖檢測是一種有價值的工具，在細胞生物學和藥物篩選研究中有著廣泛的應用。它們經常被用于評估正常細胞的健康狀況，對于評估新型化療藥物的抗增殖效力和化合物毒性至關重要。我們給大家總結了幾種評估細胞增殖的方法，這些方法分別基于跟蹤細胞分裂的后代或監測細胞健康的關鍵參數，包括代謝活動、DNA合成或ATP濃度等指標來檢測細胞增殖。

測定細胞增殖的最準確方法是通過DNA復制過程中的BrdU（5-溴-2'-脫氧尿苷）摻入來測量新合成的DNA。或者，可以通過使用 WST、Resazurin或細胞酯酶裂解染料測量代謝活性速率或使用CFSE跟蹤細胞分裂的子代來更快速地評估細胞增殖。最終，您可以根據您細胞類型、研究方案和您希望研究的作用機制選擇最適合您的細胞增殖檢測方法，下表總結了目前常用的檢測細胞增殖的幾種實驗類型：

測量細胞增殖的方法：

DNA合成細胞增殖試驗：

測量新合成的 DNA是鑒定增殖細胞的最可靠和最精確的方法。實現這一目標的一種方法是在細胞周期的S期將胸苷類似物 BrdU (貨號：AAT-17030) 摻入新復制的 DNA 中。然后可以使用熒光標記的抗BrdU抗體檢測增殖的BrdU標記的細胞。BrdU染色適用于各種應用，包括IHC、ICC 和ELISA，并且適用于流式細胞術中其他感興趣的生物標志物染色。我們提供用 PE標記的抗BrdU小鼠單克隆抗體 (貨號：AAT-V103305)和未標記的小鼠單克隆抗 BrdU 抗體克隆 Bu20a (貨號：AAT-V103300) 和 (貨號：AAT-V103295)。

BrdU染色雖然高度準確和可重復，但這種方法相當繁瑣，因為需要用熒光抗 BrdU抗體進行后續檢測才能檢測增殖，今天給大家帶來一款全新的基于點擊化學法檢測細胞增殖的試劑盒。

基于點擊化學的EdU細胞增殖檢測（貨號：AAT-22323）
與BrdU檢測不同，乙炔基脫氧尿苷 (EdU)核苷細胞增殖檢測不依賴于通過抗體來量化新復制的DNA，也不需要進行DNA變性來促進抗體對BrdU標記的核苷的檢測。EdU（5-Ethynyl-2’-deoxyuridine）是一種胸腺嘧啶核苷類似物，能夠在細胞增殖時期代替胸腺嘧啶（T）滲入正在復制的DNA分子中，隨后通過銅催化的疊氮化物-炔烴環加成反應（即點擊化學反應，下圖）將熒光標記到EdU上面，來快速檢測細胞DNA復制活性。

圖 1. EdU細胞增殖檢測原理

圖2. BrdU檢測于EdU檢測結果對比

由于點擊反應利用雙正交部分來檢測增殖細胞，因此背景干擾最小。更重要的是，由于反應條件溫和，EdU細胞增殖分析可保持細胞形態、抗原結合位點和樣品完整性，為用戶后續多重分析提供了機會。EdU摻入細胞后，點擊化學反應和后續洗滌步驟可在60分鐘內完成，新復制的DNA可使用常見熒光成像系統或流式細胞儀進行定量。

如果您不想購買試劑盒，那么福利來啦，我們可以為您提供極具性價比的生產EdU檢測試劑盒的全套原料及標記步驟，助力您的試劑盒開發之旅：

EdU細胞增殖檢測試劑盒開發原料及建議的Protocol：

所需試劑：

1.EdU（貨號：10540），乙基乙二醇尿苷核苷

2.Cu-TBTA復合物（貨號：21050），點擊化學催化劑

3.抗壞血酸（貨號：12050）-銅的還原劑

4.疊氮基團標記熒光染料: Sulfo-Cyanine3 azide（貨號：A1330）, Sulfo-Cyanine5 azide（貨號：A3330） , BDP FL azide（11430）

5.PBS、Triton X-100 或 Tween-20

通用的標記流程如下：

1.在所需時間段內用10-20uM EdU孵育細胞/組織；

2.使用含7%甲醛的PBS溶液固定細胞15分鐘；

3.用PBS洗滌細胞；

4.用含有2% Triton X-100或0.5% Tween-20的PBS滲透處理30分鐘；

5.再次用PBS洗滌細胞；

6.制備顯影液： 制備含有2mM Cu-TBTA復合物，5μm疊氮化物標記染料，10mM Tris緩沖液pH 7.4（用于溶解磺化疊氮染料）或含有50％DMSO的100mM TRIS緩沖液（用于溶解非磺化疊氮染料）。 顯影液應該是新鮮的，因為銅（I）溶液不穩定；

1.用顯影混合物處理細胞30分鐘；

2.用PBS洗滌細胞；

3.可選：如果細胞必須用不同的熒光團標記，請使用您的標準方案進行染色

用磺基化的疊氮化物（水溶性），如Sulfo-Cyanine3疊氮化物和Sulfo-Cyanine5疊氮化物，效果最好。當使用非磺化疊氮化物如Cyanine5 azide、Cyanine3 azide或BDP FL azide 時，需確保顯影液物中的DMSO含量為 50%。如有必要，顯影后可用乙醇對細胞進行脫色。

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