DiI, DiO, DiD 和 DiR細胞膜熒光探針怎么選？

Di系列細胞膜熒光探針想必大家一定不陌生，我們做細胞膜染色的時候經常會用到，今天給大家介紹下常見的4類Di細胞膜熒光探針：DiI, DiO, DiD 和 DiR，Di系列染料是一類環境敏感型親脂性膜染料，這類探針在進入細胞膜之前熒光非常弱，當它們與膜結合或者與親脂性生物分子(例如蛋白質）結合時，其熒光強度顯著增強。一旦應用于細胞中，這類染料會在細胞內質膜中逐步擴散，在其最佳濃度條件下，可以擴散逐漸使整個細胞的細胞膜被染色。

DiI, DiO, DiD 和 DiR被激發后可以發出不同顏色的熒光，DiO和磷酯雙層膜結合后的激發光譜和發射光譜參考下圖。

DiO、DiI、DiD、DiR細胞膜熒光探針的光譜圖

DiO, DiI, DiD 和 DiR幾種細胞膜熒光探針的異同：

其中I、D、R分別代表了一個，兩個，三個雙鍵，它們是決定波長長度的關鍵，DiO, DiI, DiD 和 DiR這幾款細胞膜熒光探針的結構式如下：

DiO高氯酸鹽結構式	Dil高氯酸鹽結構式
DiD高氯酸鹽結構式	DiR碘化物結構式

DiO, DiI, DiD 和 DiR幾種細胞膜熒光探針的異同：

細胞膜熒光探針產品優點：

1. 應用廣泛：主要作用是標記細胞膜，用于活的或固定的神經元等細胞或組織的長期示蹤劑，同時還可以標記其他疏水結構，例如外泌體

2. 不會影響細胞的生存力

3. 體外培養的條件下可以存活很長時間

4. 在經過固定的神經元細胞膜上的遷移速率為 0.2-0.6mm/day

5. 在活的神經元細胞膜上的的遷移速率為 6mm/day

關于細胞膜熒光探針的使用技巧：

1.DiI 可以溶解于無水乙醇、DMSO 和 DMF，溶解度約為 1-2.5mg/ml，發現較難溶解時可以適當用超聲處理以促進溶解。

2.用于細胞膜熒光標記時，DiI 的常用濃度為 1-25μM，最常用的濃度為 5-10 μM。

3. DiI 可以直接染色活的細胞或組織，染色時間通常為 5-20 分鐘。

4. 染固定的細胞時，通常使用 4%多聚甲醛進行固定，使用其它不適當的固定液會導致熒光背景較高。

Di家族細胞膜熒光探針選擇小tips：

DiI, DiO, DiD 和 DiR均可染色活細胞或固定細胞及組織（請您根據您的需求選擇相應的探針），DiI比DiO熒光更亮；DiD，DiR（D12731）波長更長，更適合組織染色；

DiR應用實列賞析：

源文獻：Novel approach for the detection of intraperitoneal micrometastasis using an ovarian cancer mouse model Journal: Scientific Reports (2017)

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