Blasticidin S，殺稻瘟菌素S（滅瘟素）

      Blasticidin S殺稻瘟菌素S（滅瘟素）是一種多肽核苷類抗生素。它首先從S.griseochromogenes中分離出來。利用衍射儀數據確定了五水合物形式的結構，與抗生素阿米西汀相似，親水和疏水基團位于分子的兩側。此后利用全合成法創造了它。在研究中，Blasticidin S用于篩選攜帶有bsr或BSD耐受基因的轉染細胞。殺稻瘟菌素具有快速而強效的作用模式，很低的抗生素濃度便能導致細胞迅速死亡。

      目前已經克隆和測序的殺稻瘟菌素耐受基因有3種，一種是分離自產生菌Streptoverticillum sp.的乙?；D移酶基因bls，另外兩種是脫氨酶基因，包括從Bacillus cereus 中分離的bsr和從Aspergillus terreus 中分離的BSD 基因。Bsr和 BSD 基因是最常用的篩選標志，用于哺乳動物和植物細胞的基因轉移實驗，也可用于E.Coli。

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      更多，推薦參考資訊：

       1）Escherichia coli應用濃度

      Ecoli對Blasticidin S的敏感性稍差，但是轉化子對Blasticidin S具有耐受性，可以用低鹽LB培養基（pH 8）進行篩選，濃度范圍為50-100 ug/mlBlasticidin S。高pH值可以提高Blasticidin S的活性。

       2）哺乳動物細胞，應用濃度

      哺乳動物細胞中Blasticidin S的工作濃度范圍在1-50 ug/ml（通常為10 ug/ml）。初次實驗建議通過滅殺曲線來確定最佳使用濃度。一些哺乳動物細胞的建議工作濃度：

      操作步驟（哺乳動物穩轉株篩選）

      1）轉染后48h，用含有適宜濃度Blasticidin S的新鮮培養基將細胞傳代（注：細胞處于活躍分裂期時抗生素工作最好。細胞密度太高，抗生素效率降低。細胞分盤時覆蓋率最好不超過25%）。

      2）每3-4天去除培養基，加入含抗生素的新鮮培養基。

      3）7天后檢測細胞集落形成。根據宿主細胞種類和轉染/篩選效率，集落形成可能需要增加一周或更久。      

      4）轉移5-10個耐受克隆到35 mm細胞盤中，加入選擇培養基維持培養7天。隨后用細胞毒性實驗進行檢測。

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