【ATSbio爆品】抗體藥物(ADC)內化體外檢測新工具-pHast

過去十年來，生物制劑越來越多地被用作治療藥物。對于抗體藥物偶聯物(Antibody-Drug Conjugates，ADC)，抗體的內化是一種強有力的作用機制，可以使ADC從靶細胞質膜上的結合位點轉移至溶酶體的裂解環境內，從而激活與其相連的毒素。   

內化過程的效率與ADC的治療指數直接相關，，提供便捷高效且易于使用的研究內化的抗體標記工具。   

上期我們介紹了基于生物毒素皂草素(ZAP)二級偶聯物的抗體內化檢測方案：抗體內化，抗體藥物篩選經典方案（中文操作指南） 

今天我們給大家帶來一款基于熒光報告探針的抗體內化檢測工具——pHast(替代pHrodo技術)，pHast偶聯物是定量檢測抗體的特異性、結合情況和內化水平的最快工具之一，可在1天內獲得結果，pHast是一種pH依賴性熒光報告探針，這種熒光報告探針在胞外中性pH下幾乎無熒光，一旦內化進入細胞后可發出明亮的熒光。pHast于二抗形成pHast偶聯物，可以很方便的檢測抗體的內化水平。  

pHast偶聯物檢測原理及應用示例：

         我們可以提供不同種屬來源，完整IgG以及Fab片段的pHast綴合物：   

  除了抗體pHast偶聯物，同時我們還可以提供鏈霉親和素pHast偶聯物（PH-03）,鏈霉親和素pHast與生物素化蛋白結合，通過pH依賴性熒光報告探針（pHast）來檢測藥物內化水平：

       引文賞析：

       Shramm PA, Ancheta L (2019) Streptavidin-pHast: A readily conjugatable, pH-sensitive dye to screen for internalization. Cancer Res 79(13 Suppl):2177. Proceedings of the American Association for Cancer Research Annual Meeting, Atlanta GA.

       Kinneer K, Meekin J, Tiberghien AC, Tai YT, Phipps S, Kiefer CM, Rebelatto MC, Dimasi N, Moriarty A, Papadopoulos KP, Sridhar S, Gregson SJ, Wick MJ, Masterson L, Anderson KC, Herbst R, Howard PW, Tice DA (2018) SLC46A3 as a potential predictive biomarker for antibody-drug conjugates bearing noncleavable linked maytansinoid and pyrrolobenzodiazepine warheads. Clin Cancer Res 24(24):6570-6582. doi: 10.1158/1078-0432.CCR-18-1300

       Shramm PA, Ancheta L, Higgins D, Lappi DA (2017) A rapid, pH-sensitive screening method to detect internalization of cell surface markers for development of antibody-based pharmaceuticals to treat brain tumors. Neuroscience 2017 Abstracts 566.24 / H7. Society for Neuroscience, Washington, DC.

       Ancheta L, Shramm PA, Lappi DA (2017) Method for screening neuronal tumor cell surface markers for high specificity and rapid internalization as potential oncologic treatments. Neuroscience 2017 Abstracts 612.11 / SS46. Society for Neuroscience, Washington, DC.

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