經典染料系列2——香豆素及其衍生物

      前情回顧：經典染料1——熒光素及其衍生物

      上一期我們給大家介紹了經典染料中大名鼎鼎的熒光素，今天來帶大家了解一下另一款經典染料——香豆素，香豆素和香豆素衍生物是紫外線可激發的藍色熒光染料，其發射波長范圍約為390至480nm。用途最廣泛的香豆素包括AMCA，7-氨基香豆素（AFC和AMC），7-羥基香豆素和7-甲氧基香豆素的衍生物， 用于制備藍色熒光肽，蛋白質和其他生物分子。與熒光素，羅丹明和花青素相比，香豆素由于其相對較低的消光系數而產生中等亮度和光穩定性的熒光。

      藍色熒光探針最適合用于細胞骨架等高豐度靶標的直接成像，細胞追蹤應用，檢測酶活性和某些多色熒光應用的底物-包括免疫熒光，核酸和蛋白質微陣列，原位雜交和神經元追蹤。

       光譜性質

       表1. 7-氨基-4-三氟甲基香豆素（AMC）的光譜性質。

圖1. AMCA（一種常用的香豆素衍生物）的激發和發射光譜。

       iFluor™350-替代物——AMCA和AlexaFluor®350

      iFluor™350染料是一種與AMCA光譜相似的亮藍色熒光染料，具有改善的水溶性，光穩定性和更高的熒光量子產率。iFluor™350偶聯物非常適合于高豐度靶標的直接成像，在多色應用（例如流式細胞儀和超分辨率熒光顯微鏡）中特別有用，而不會影響綠色和紅色熒光探針的性能。

      圖2.將 HeLa細胞固定在4％甲醛中，然后用Phalloidin iFluor™350偶聯物和Nuclear Orange™DCS1染色。

       表2. iFluor™350——AMCA和AlexaFluor®350的替代產品

       香豆素相關產品

      我們提供多種香豆素相關產品，包括用于標記肽，蛋白質和其他生物分子的活性染料，綴合物，指示劑和用于檢測細胞，勻漿和溶液中酶活性的底物。

       1. 參考標準：

      7-羥基-4-甲基香豆素（4-甲基傘形酮）（Cat# 41）

      7-羥基-4-三氟甲基香豆素（Cat# 82）

      3-氰基-7-羥基香豆素（Cat# 40）

      6-氯-8-氟傘形酮（CF-MU）（Cat# 42）

       2. 前體

      7-氨基-4-三氟甲基香豆素（AFC）（Cat# 56）

      7-氨基-4-甲基香豆素（AMC）（Cat# 51）

      2,4-二氟間苯二酚（Cat# 4023）

      4-氟間苯二酚（Cat# 4022）

       3. 反應性香豆素染料

       反應性熒光香豆素和香豆素衍生物廣泛用于共價標記生物分子，例如抗體，碳水化合物，核酸，蛋白質，肽和寡核苷酸。香豆素共軛物可產生適度明亮和光穩定的藍色熒光，當與綠色，黃色或紅色熒光探針結合使用時，通常用作檢測酶活性或在彩色熒光研究中提供對比的底物。香豆素和香豆素衍生物很容易在各種染料標記化學中獲得，包括：

      琥珀酰亞胺酯/ NHS酯-用于標記抗體，蛋白質，肽，胺修飾的寡核苷酸和其他生物分子上的游離胺（-NH？）

      馬來酰亞胺-用于標記抗體，蛋白質和肽上的巰基

      疊氮化物-通過點擊化學法標記亞乙基

      炔烴-通過點擊化學法標記疊氮化物

      酰肼-用于標記醛基和酮基

      羧酸-用碳二亞胺預活化后標記胺，或用于醇類的Steglich酯化

      胺-用于標記各種親電子化合物，例如活化的酯

       表3. 可用的反應性香豆素和香豆素衍生物。

      Note：ε= 在其最大吸收波長處的摩爾消光系數（單位= cm ^-1 M ^-1）

       4. 香豆素標記的酶底物

      香豆素和香豆素衍生物經常用于制備熒光底物，以檢測細胞和溶液中的酶活性。當被目的酶水解時，香豆素修飾的底物顯示出與酶活性成線性比例的熒光強度增加。AAT Bioquest提供了多種香豆素修飾的底物，可用于檢測Caspase，蛋白酶，肽酶，磷酸酶等的活性。

       表4. 可用香豆素標記的熒光底物。

        5. 香豆素標記的綴合物

      香豆素標記的結合物因其亮藍色熒光和出色的光穩定性而在生物成像和生物標記中具有廣泛的應用。香豆素衍生物可以標記抗體，鏈霉親和素，鬼筆環肽，膜聯蛋白v和其他生物分子，以研究細胞凋亡，標記細胞器或通過放大微弱信號來提高測定靈敏度。

       表5.可用香豆素標記的綴合物。

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