大鼠補體C3(C3)ELISA試劑盒--檢測程序和測試原理方案

Abbexa大鼠補體C3（C3）ELISA試劑盒是一種用于體外定量測量血清、血漿和其他生物液體中大鼠補體C3（C3）濃度的ELISA試劑盒。

艾美捷大鼠補體C3(C3)ELISA試劑盒：

貨號：abx256750

靶標：補體C3（C3）  

反應性：大鼠  

已測試應用：ELISA  

推薦稀釋度：最終用戶應確定最佳稀釋度/濃度。  

儲存：以4°C運輸。收到后，根據試劑盒說明書中的儲存說明儲存試劑盒。  

有效期：該試劑盒的有效期至少為6個月。根據要求可提供長達12個月的有效期。  

穩定性：試劑盒的穩定性由活性損失率決定。在適當的儲存條件下，到期日內的損失率小于5%。為盡量減少性能波動，應嚴格控制操作程序和實驗室條件。還強烈建議整個檢測過程由同一用戶完成。  

檢測范圍：7.81 ng/ml - 500 ng/ml  

靈敏度：4.69 ng/ml  

標準形式：凍干  

檢測方法：比色法  

檢測類型：夾心法  

檢測數據：定量  

樣本類型：血清、血漿和其他生物液體。  

大鼠補體C3(C3)ELISA試劑盒檢測原理：

該試劑盒基于夾心酶聯免疫吸附測定技術。96孔板上預先包被有抗體。將標準品、測試樣品和生物素偶聯試劑加入孔中并孵育。然后加入HRP偶聯試劑，并將整個板孵育。在每個階段使用洗滌緩沖液去除未結合的偶聯物。使用TMB底物定量HRP酶促反應。加入TMB底物后，只有含有足夠C3的孔才會產生藍色產物，加入酸性終止液后變為黃色。黃色的強度與板上結合的C3量成正比。在450 nm波長下用微孔板讀數器比色法測量光密度（OD），從而計算出C3的濃度。  

大鼠補體C3(C3)ELISA試劑盒組分：  

- 預包被的96孔微孔板  

- 標準品  

- 標準品稀釋緩沖液  

- 洗滌緩沖液  

- 檢測試劑A  

- 檢測試劑B  

- 稀釋液A  

- 稀釋液B  

- TMB底物  

- 終止液  

- 板封  

所需但未提供的材料：  

- 37°C培養箱  

- 多通道和單通道移液器及無菌移液器頭  

- 噴霧瓶或自動微孔板洗滌器  

- 1.5 ml試管  

- 蒸餾水  

- 吸水濾紙  

- 100 ml和1升量筒  

- 微孔板讀數器（波長：450 nm）  

- ELISA振蕩器  

試劑準備：  

1）標準品：用推薦體積的標準品稀釋緩沖液制備標準品溶液。然后按照協議中的指示，用標準品稀釋緩沖液進行標準品溶液的系列稀釋。  

2）洗滌緩沖液：按照協議中的指示，用蒸餾水稀釋濃縮洗滌緩沖液。  

3）檢測試劑準備：計算所需的工作溶液總量。分別用稀釋液A和稀釋液B將檢測試劑A和檢測試劑B按1:100稀釋。  

檢測程序：

1）設置標準品、測試樣品和對照孔。  

2）將100 ?l稀釋后的標準品加入標準品孔中。  

3）將100 ?l標準品稀釋緩沖液加入對照（零）孔中。  

4）將100 ?l稀釋后的樣品加入樣品孔中。在37°C下孵育90分鐘。  

5）將100 ?l檢測試劑A加入每個孔中。在37°C下孵育1小時。  

6）洗滌3次。  

7）將100 ?l檢測試劑B加入每個孔中。在37°C下孵育30分鐘。  

8）洗滌5次。  

9）將90 ?l TMB底物加入每個孔中。在37°C下孵育10-20分鐘。  

10）加入50 ?l終止液。  

11）在450 nm處測量OD值。  

結果計算：

對于計算，將每個參考標準品和每個樣品的O.D.450重復讀數平均，并減去平均對照（零）O.D.450讀數?？梢詫藴是€繪制為每個參考標準品溶液的相對O.D.450（Y）與每個標準品溶液的相應濃度（X）之間的關系。樣品的C3濃度可以從標準曲線中插值計算得出。  

檢測精密度：  

批內精密度（同一檢測內的精密度）：分別在一塊板上測試3個低、中、高濃度水平的補體C3（C3）樣品，各測試20次。  

批間精密度（不同檢測之間的精密度）：在3塊不同的板上測試3個低、中、高濃度水平的補體C3（C3）樣品，每塊板8個重復。  

CV（%）=（標準差/平均值）× 100  

批內精密度：CV<10%  

批間精密度：CV<10%  

顯示大鼠補體C3（C3）標準OD數據的圖表