VitroGel STEM，更加簡單和高效的細胞收獲方案

VitroGel STEM與大多數hPSC培養基和組織培養器皿兼容。由于D特的靜態懸浮培養方案，在大型生物反應器中使用時不需要微載體，從而使細胞收獲更加簡單和高效。使用VitroGel STEM 培養的 3D hPSCs細胞團可用于進一步的傳代培養、分化或重新建立 2D 培養形態。

艾美捷VitroGel STEM 參數：

貨號：VHM02

配方：無異種成分，功能性水凝膠

用途：用于人類多能干細胞的三維靜態懸浮培養

操作：室溫下即用型

細胞收獲：VitroGel組織球回收溶液

5-15分鐘細胞恢復

pH值：中性

儲存：在2-8°C下儲存，常溫運輸

規格：10毫升和2毫升

初始靜態懸浮培養方案：

推薦的材料和試劑

VitroGel STEM

hPSCs培養基（mTeSR-PLUS、StemFlex、mTeSR-1、Essential 8、NutriStem hPSC 等）

Y-27632 （10 mM/mL）

VitroGel Cell Recovery Solution（cat#MS03-100）（可選）

40、70 或 100 μm 可逆過濾器 （可選）

細胞消化液 （可選）

錐形離心管 （15 mL 或 50 mL）

血清移液器

細胞培養器皿（孔板、T培養瓶、錐形培養瓶）

注意：VitroGel STEM與各種培養器皿兼容，在靜態懸浮培養中培養hPSCs。根據所需的培養規模和每個實驗室的可用系統，可能需要針對單獨的細胞類型優化培養體積。

設備：

生物安全柜（ II類）

CO2 培養箱（37℃、5% CO2 和 95% 濕度）

離心機

移液器

定軌搖床、旋轉瓶或生物反應器，低速 10-40 rpm （可選）

VitroGel STEM的培養周期：

①7 天培養周期，第 3/4 天增加培養基

②3 天/4 天培養周期，無需額外培養基

操作指南：

1.從 2D包被凝膠表面收獲的hPSC; 或直接使用液氮凍存的細胞。（離心得到細胞沉淀以除去細胞消化液或細胞冷凍液）。

2.在含有10μm/mL Y-27632的hPSCs培養基中制備細胞懸液。建議細胞密度為0.2-5×106個/ mL，用于水凝膠懸浮培養的最終細胞密度約為0.1-5×105個/ mL。

如果需要，可通過小心地上下吸取懸浮液，將細胞團打散到30-70μm的大小。不建議使用單細胞懸液。

根據所需的培養條件和hPSCs細胞團的最終尺寸，應針對單獨的細胞類型優化細胞接種密度。

3.以2：1的體積比例輕輕地將VitroGel STEM與細胞團懸液混合（例如，將2mL的VitroGel STEM與1mL的 細胞團懸液混合。

4.以5：1的體積比例將hPSCs培養基（可選：10μm/mL Y-27632）添加到細胞-水凝膠混合物中（例如，將15 mL hPSCs培養基與3 mL細胞-水凝膠混合物混合）。小心地上下吸取，使培養基和混合物均勻混合。

hPSCs培養基和細胞-水凝膠混合物的混合體積比例可以在1：1至20：1之間調節，具體取決于最終混合物所需粘度和培養條件。如果混合體積比高于 5：1，則可能需要定軌搖床或旋轉瓶，并將其設置為10-40rpm的速度以維持細胞懸液。

5.將所需體積的混合物加入培養器皿中，并在含有5% CO2的37℃環境中孵育。

7天的培養周期添加額外的培養基：在第3天或第4天，將所需體積的hPSCs培養基（不含Y-27632）直接加入培養皿中。

注意：

選擇3天/4天培養周期或7天培養周期取決于hPSCs細胞團的接種密度和所需條件。對于高細胞接種密度，3天/4天周期可以培養出100-200μm大小的細胞團。

每當培養基顏色開始變黃時，需要添加一個培養周期所需的額外培養基。（當水凝膠懸液中的初始細胞接種密度高于1×105個/ mL時，可能需要添加3天或4天的培養周期額外的細胞培養基。

如果在培養周期內加入額外的培養基超過一次，則可能需要定軌搖床10-40rpm以維持細胞懸液。